盘二孢菌的生物学特性及防控研究

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　　摘要  观察盘二孢菌（Marssonina sp.）对杉木叶片的危害症状，采用组织分离法分离病原微生物，并进行盘二孢菌生物学特性研究，包括菌落形态、孢子大小和显微镜检特征鉴定。选择百菌清、甲基硫菌灵分别对盘二孢菌病原菌进行化学防治试验，结果表明，百菌清对盘二孢菌有明显的抑菌作用，甲基硫菌灵对盘二孢菌的抑菌作用不显著。
　　关键词 盘二孢菌;杉木;病原微生物;化学防治
　　中图分类号：S763.7 文献标识码：A 文章编号：2095-3305（2019）02-001-02
　　DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2019.02.001
　　Abstract The symptom of Marssonina sp. on China fir leaves was observed， the pathogenic microorganisms were isolated by tissue isolation method， and the biological characteristics of the funfus were studied， including colony morphology， spore size and microscopic characteristics. Chlorothalonil and thiophanate?methyl were selected to control Marssonina sp.. The results showed that chlorothalonil had obvious bacteriostatic effect on Marssonina sp.， but thiophanate?methyl had no significant bacteriostatic effect on Marssonina sp.
　　Key words   Marssonina sp.; China fir; Pathogenic microorganisms; Chemical control
　　盘二孢菌（Marssonina sp.）隶属于半知菌亚门腔孢纲黑盘孢目，是由盘长孢属更名而来的。从20世纪初盘二孢菌被发现以来，国内外研究学者围绕引致盘二孢菌的病原菌种类、生活史和生物学特性，盘二孢菌与寄主互作关系，病害的发生流行规律以及药剂防治等问题开展了一系列探索性研究。但目前对适宜于盘二孢菌生长和繁殖的环境条件尚不清晰，对盘二孢菌的群体结构、遗传多样性以及致病性分化特点等信息的了解尚为空白，对盘二孢菌在叶片上的侵染致病过程仍不明确，且缺乏各类药剂对盘二孢菌不同生长发育时期的毒力作用，以及药剂防治关键时期等病害防治的基础理论信息，造成生产上病害防治盲目，既无法有效控制病害的发生和蔓延，也不利于安全生产。
　　盘二孢菌主要危害植物的叶柄和叶片，有时也危害植物的嫩梢和果穗柄，影响植物光合作用，可能导致大量落叶，极大影响了植物的观赏性和生长。盘二孢菌对黔东南州的杉木危害较重，但至今未见盘二孢菌在黔东南乃至贵州省的相关研究。通过对盘二孢菌生物学特性及化学抑菌研究，可以有效地掌握它的生物学特性、适合该菌生长及病害发展的气候条件、研究盘二孢菌的致病性差异，从而为提高黔东南州杉木的抗病性、减少药剂防治以及促进城镇的绿化发展提供重要科学依据。
　　1 材料与方法
　　1.1试验材料
　　1.1.1植物标本 杉木盘二孢菌病叶于2016年5月23日采自贵州省凯里市舟溪镇舟南村。
　　1.1.2 仪器 高压蒸汽灭菌锅、无菌操作台、恒温培养箱、微波炉、电磁炉、摇床、奥林巴斯BX53荧光显微镜、照相机、培养皿、打孔器、试管、锥形瓶、解剖刀、酒精灯、喷壶、接种针、接种环、保鲜袋、载玻片、盖玻片等。
　　1.1.3 试剂 链霉素、蔗糖、琼脂、72%乙醇、0.1%升汞。采用百菌清、甲基硫菌灵防治盘二孢菌（表1）。
　　1.2 试验方法
　　1.2.1 盘二孢菌病叶观察与描述 对杉木病株的病害组织进行观察，从病害组织表面病斑形态、病斑颜色、病斑大小等方面进行描述，并拍照记录。
　　1.2.2 盘二孢菌的分离纯化 采用组织分离法分离杉木病叶的盘二孢菌。在无菌操作台上，分别切取2～3块2～4 mm的病原组织，消毒处理后呈三角形放置在PSA平板上，将其倒置于28℃的恒温培养箱中连续培养3～5 d;分别挑取新长菌落的菌丝到新的PSA平板上培养3～5 d，多次操作直至得到纯培养，再对菌落形态结构进行观察和拍照。
　　1.2.3 盘二孢菌的鉴定 采用先进的光学显微镜观察菌落形态结构特征，包括菌丝的颜色、形状，有无隔膜和分支，观察孢子的着生方式、形态等，并测量菌丝和孢子的大小，同时拍照记录。
　　1.2.4 百菌清对盘二孢菌的抑制试验   用打孔器在长势基本相同的盘二孢菌菌苔上打2～3个孔，用移液枪取200 μl药品置于PSA培养基中，倒入培养基摇匀，取一个菌苔置于处理的PSA平板中央，标记为百菌清，同时取另一相同菌苔于新的PSA培养基中央做對照试验，将平板倒置于28℃恒温培养箱中培养3～5 d，每天定时观察拍照和测量菌苔的长势。盘二孢菌菌落抑菌率=（CK-处理菌落直径）/（CK-打孔器直径）×100%。
　　1.2.5 甲基硫菌灵对盘二孢菌的抑制试验 移取甲基硫菌灵20 μl到培养皿中，再加入10 ml PSA培养基混匀，放置冷却备用，平板冷却后，用打孔器在长势基本相同的盘二孢菌菌苔上打3～5个孔，用接种针挑取菌苔分别置于配置好的平板中央，以PSA平板作对照，倒置于28℃培养箱中培养3～12 d，每天定时观察测量菌苔的长势，并拍照记录。 　　2 结果与分析
　　2.1 盘二孢菌危害杉木的病症
　　观察盘二孢菌侵害杉木的病叶，发病叶片的叶尖部位最先开始发黄枯萎，然后沿这一部位向叶基扩散枯萎，颜色初为褐色，渐变为黑褐色。大部分叶片边缘先枯萎，最后整个叶片干枯，有明显的病害交界线（图1～2），发病严重时整株叶片全部枯萎。
　　2.2 盘二孢菌的生物学特性
　　盘二孢菌菌落呈绒毛状向四周扩展生长，菌丝前期为桃花色，后期为白粉色，菌丝较粗，气生菌丝疏松，不致密，易挑取，有同心轮纹。
　　挑取盘二孢菌菌丝制片在光学显微镜（10×40）下观察，可以看到菌落菌丝无色透明，有隔膜，有分支，分生孢子梗短，不分支，分生孢子梗颜色略深，分生孢子倒梨形、卵圆形或椭圆形，具有横隔膜（图3～4）。通过测量菌落（50个孢子）计算得孢子大小为（2.89～8.72） μm×（10.14～14.11） μm。
　　2.3 化学制剂对盘二孢菌的抑菌结果
　　由表2可知，百菌清对盘二孢菌有明显的抑菌作用，抑菌率可达50%;甲基硫菌灵对盘二孢菌的抑菌作用不显著，抑菌率仅12.5%（表2）。
　　3 结论
　　试验通过前期的标本采集、盘二孢菌侵染特征观察、分离纯化得到盘二孢菌，最后经鉴定后得出贵州省凯里市舟溪镇舟南村的致盘二孢菌主要有盘二孢菌（Marssonina sp.）。盘二孢菌以菌丝体、分生孢子盘在落地病叶上或枝梢的病组织上越冬。翌年雨季到来时产生分生孢子而成为初侵染源，是引起植物病害的重要真菌类群之一。盘二孢菌存在着地理差异的现象，我国国内学者曾大鹏等研究发现，我国南方地区盘二孢菌的致病力要高于北方地区。
　　杉木病害不仅造成黔东南州杉木生产和森林资源的重大损失，还使生态环境遭受了严重破坏，制约着黔东南州林业又好又快地发展，提出科学、有效的病害防治措施十分必要。采用百菌清、甲基硫菌灵分别对盘二孢菌进行化学防治，结果表明百菌清对盘二孢菌有较显著的抑制作用。对盘二孢菌的生物学特性及防控研究，为提高黔东南州杉木的抗病性、促进城镇绿化的发展提供了科学依据，同时也为杉木病害的化学防治提供了有效的参考。
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　　责任编辑：郑丹丹
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