临床病理结合Galectin-3、CK19、HBME-1、AAT及CD56对诊断甲状腺乳头状癌的意义

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　　【摘 要】 目的 对甲状腺乳头状癌的病理学形态进行总结，并分析免疫组织化学指标Galectin-3、 CK19、 HBME-1、AAT及CD56的在甲状腺乳头状癌中的表达情况，探讨其对诊断甲状腺乳头状癌的意义。方法 选取甲状腺乳头状癌227例为观察组，选取结节性甲状腺肿168例為对照组，在病理学研究基础上，应用免疫组织化学染色，分别检测两组组织表达Galectin-3、 CK19、 HBME-1、AAT及CD56的情况。结果 甲状腺乳头状癌病理学形态表现为：真性乳头的形成（72.24%）和（或）特征性的核变化，包括核增大、出现核仁（98.23%），核排列重叠拥挤、轮廓不规则（96.47%），毛玻璃样核（88.54%），核沟（73.56%），核内假包涵体（28.63%），砂粒体（16.30%），肿瘤纤维化（62.99%）。免疫组织化学染色提示甲状腺乳头状癌中Galectin-3（95.15%）、CK19（99.19%）、HBME-1（92.09%）、AAT（96.48%）阳性表达率均显著高于结节性甲状腺肿，且以强阳性及中等阳性为主，CD56（3.08%）阳性表达率显著低于结节性甲状腺肿。结论 病理学光镜诊断基础上联合免疫组织化学标记能显著提高甲状腺乳头状癌诊断的敏感度及准确性。
　　【关键词】乳头状癌;甲状腺;免疫组织化学;Galectin-3;CK19;HBME-1;AAT;CD56;结节性甲状腺肿
　　Abstract Objective：Summarize the pathology form and analysis to the expression of Galectin-3， CK19， HBME-1， AAT and CD56 in papillary thyroid carcinoma，in order to investigate the importance of diagnosis of papillary thyroid carcinoma.Method：227 cases of papillary thyroid carcinoma were selected as the observation group， and 168 cases of nodular goiter were selected as the control group.On the basis of pathological study，we used immunohistochemical staining to analysis the expressions of Galectin-3， CK19， HBME-1， AAT and CD56 in the two groups.Result：The pathological morphology of papillary thyroid carcinoma is characterized by true nipple formation（72.24%）and（or） characteristic nuclear change，which including enlargement of the nucleus and presence of nucleoli （98.23%），overlapping， crowded， and irregularly shaped contours （96.47%），frosted glass nucleus （88.54%），nuclear groove （73.56%）， intranuclear inclusion bodies （28.63%），sand bodies （16.30%），tumor fibrosis （62.99%）.IHC staining showed Galectin-3 in papillary thyroid carcinoma （95.15%）， CK19 （99.19%）， HBME-1 （92.09%）， AAT （96.48%） positive expression rate was significantly higher than in nodular goiter， and most of them were strong positive or moderate positive， CD56 （3.08%） positive expression rate was significantly lower than in nodular goiter. Conclusion：Pathological and light microscopic diagnosis combine with immunohistochemical staining can significantly improve the sensitivity and accuracy of the diagnosis of papillary thyroid carcinoma.
　　Keyword Papillary carcinoma;Thyroid;Immunohistochemistry;Galectin-3;CK19;HBME-1;AAT;CD56; Nodular goiter
　　【中图分类号】R736.1 【文献标识码】B 【文章编号】1672-3783（2019）06-03--01
　　甲状腺乳头状癌是全世界范围内地方性甲状腺肿非流行区域最常见的甲状腺上皮源性恶性肿瘤【1】。近几年来，其发病率在我国呈上升趋势，约占整个甲状腺肿瘤的70%【2】，该病通常呈惰性经过，预后较好，10年生存率高达80%以上【3】。在临床病理诊断过程中，经典的甲状腺乳头状癌依据其独特的核特征，可以做出准确的病理诊断，但由于乳头状癌有许多亚型及核的特征不典型时不易做出准确的判断，需要借助必要的辅助诊断手段来实现，临床病理诊断过程中通常借助免疫组化染色辅助诊断。鉴于此，本文对227例甲状腺乳头状癌的病理学形态进行总结，并探讨Galectin-3、CK19、HBME-1、AAT及CD56这5个免疫组织化学指标在甲状腺乳头状癌病理诊断中的意义。 　　1 研究对象与方法
　　1.1 研究对象
　　以2015年6月至2017年4月笔者所在医院普外科手术切除的甲状腺乳头状癌227例及同期结节性甲状腺肿168例为研究对象。选取诊断明确为甲状腺乳头状癌的病例227例为观察组，年龄19-67岁，其中男性34例，平均年龄59.81±10.35岁，女性193例，平均年龄34.42±17.26岁。选取诊断明确为结节性甲状腺肿的病例168例为对照组，年龄 17-74岁，其中男性48例，平均年龄62.06±14.32岁，女性120例，平均年龄41.28±8.29岁。两组在性别、年龄等方面比较差异无统计学意义（= 1.46，P>0.05），具有可比性。
　　1.2 主要试剂
　　以下试剂均采用北京中杉金桥生物技术有限公司产品：鼠抗人单克隆抗体Galectin-3（半乳糖凝集素3）、鼠抗人单克隆抗体CK19（低分子细胞角蛋白）、鼠抗人单克隆抗体HBME-1（人骨髓内皮-1）、兔抗人多克隆抗体AAT（a-1抗胰蛋白酶抗体）、鼠抗人单克隆抗体CD56（神经细胞黏附分子）、DAB显色盒、EDTA修复液、PBS磷酸盐缓冲液。
　　1.3 方法
　　所有标本均经10%的福尔马林固定、石蜡包埋及切片、常规HE染色后在显微镜下观察。免疫组化染色采用两步法，常规石蜡切片、脱蜡后，高温高压修复，加一抗及二抗，采用DAB显色，苏木素复染、封片、阅片。
　　1.4 免疫组织化学结果判读
　　随机选择5个高倍视野，计数500个以上细胞，以细胞膜或者胞浆着色判断为阳性，根据阳性细胞数及细胞染色强度进行半定量。无阳性细胞：计0分;阳性细胞数1%-30%，计1分;31%-70%，计2分;71%-100%，计3分。再根据阳性着色强度依次计1、2、3分（浅棕色为1分，棕黄色为2分，深棕色為3分），每张切片进行两项分数累计，0分为阴性，1-2分为阳性，3-4分为++，5-6分为+++。
　　1.5 统计分析方法
　　将收集的数据录入excel2007进行整理，用spss17.0统计软件包进行数据分析。计数资料以例数/（百分比）表示，组间比较采用检验。以p<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 甲状腺乳头状癌显微镜下主要形态学特征，见表1，图1。
　　甲状腺乳头状癌病理学形态表现为：真性乳头的形成（72.24%）和（或）特征性的核变化，包括核增大、出现核仁（98.23%），核排列重叠拥挤、轮廓不规则（96.47%），毛玻璃样核（88.54%），核沟（73.56%），核内假包涵体（28.63%），砂粒体（16.30%），肿瘤纤维化（62.99%）。
　　3 讨论
　　甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是甲状腺最常见的恶性肿瘤，经典的PTC经过常规HE染色即可通过其独特的“核”特征进行诊断，但当其核的形态学特征不明显或出现各种PTC亚型时往往容易误诊及漏诊，这时病理医生需借助其他的辅助手段来进行综合判断，免疫组织化学染色在此时发挥着重要的作用。中外病理学家一直在寻找对于PTC敏感性及特异性均较高的抗体。本文在对PTC组织标本经HE染色后显微镜下病理诊断特点进行归纳、分析基础上，选择Galectin-3、CK19、HBME-1、AAT及CD56这5个免疫组织化学标记对PTC进行标记，希望能找出对PTC有着较高的敏感性及特异性的辅助诊断指标。
　　目前有观点认为显微镜下PTC的主要形态学特征包括：①核增大、出现核仁;②核排列重叠拥挤、轮廓不规则;③核毛玻璃样或透明变;④核沟;⑤砂粒体。另次要形态学特征包括：①乳头状结构、流产型乳头;②滤泡上皮形态不规则;③核质浓稠;④核内假包涵体;⑤滤泡内多核巨细胞反应存在;⑥肿瘤纤维化。主要形态学特征满足4项以上，且次要形态学特征满足4项以上，可考虑诊断甲状腺乳头状癌【4】。本文通过对227例诊断明确为PTC的组织标本经行回顾性总结、分析，其镜下病理学特征主要包括：真性乳头的形成（72.24%）和（或）特征性的核变化，包括核增大、出现核仁（98.23%），核排列重叠拥挤、轮廓不规则（96.47%），毛玻璃样核（88.54%），核沟（73.56%），核内假包涵体（28.63%），砂粒体（16.30%），肿瘤纤维化（62.99%）。该结果与前述诊断标准基本一致，可认为前述诊断标准合理、可行，值得在临床病理诊断中应用及推广。
　　Galectin-3又称半乳糖凝集素3，是一个同型细胞粘附凝集素，它是由β-半乳糖苷键结合蛋白和一个层粘蛋白构成的嵌合体。它可以下调非特殊类型的浸润性乳腺癌、恶性黑色素瘤的相关蛋白的表达，促使肿瘤进行转移，因此可以作为肿瘤恶化程度的一个参考指标【5】。在227例PTC组织中，Galectin-3阳性表达占95.15%，显著高于结节性甲状腺肿的2.98%（c2=37.96，P<0.05），且以强阳性177（81.94%）及中等阳性25（11.57%）为主。
　　CK19又称低分子细胞角蛋白，是一种为分子量为40KDa的低分子细胞角蛋白，主要用于标记各类单层扁平及立方上皮。Caey MB等研究表明CK19在PTC中常表达阳性，且以强阳性表达为主，在结节性甲状腺肿中不表达或弱阳性表达，故可以用于PTC的诊断及鉴别诊断【6】。在227例PTC组织中，CK19阳性表达占99.19%，显著高于结节性甲状腺肿的3.06%（=44.30，P<0.01），且以强阳性176（78.22%）及中等阳性46（20.44%）为主，故本研究支持上述观点。
　　HBME-1又称人骨髓内皮-1，是间皮细胞表面微绒毛的一种抗原成分，常常被用于间皮来源肿瘤的诊断与鉴别诊断。目前已有文献证明该指标在甲状腺乳头状癌中常常表达阳性，可以用于其诊断与鉴别诊断【7】。在227例PTC组织中，HBME-1阳性表达占92.07%，显著高于结节性甲状腺肿的4.17%（=35.03，P<0.05），且以强阳性118（56.45%）及中等阳性36（17.22%）为主。 　　AAT为a-1抗胰蛋白酶抗体，是肝细胞合成的血清中的一种糖蛋白，可以标记组织细胞与网状组织细胞。临床病理诊断中作为恶性纤维组织细胞瘤的标记物【8】。在227例PTC组织中，AAT阳性表达占96.48%，显著高于结节性甲状腺肿的2.40%（=39.17，P<0.01），且以强陽性159（72.60%）及中等阳性37（16.89%）为主。
　　CD56，是一种神经细胞黏附分子，表达于神经元、神经膜细胞、星形细胞、自然杀伤细胞、肝窦周星状细胞及一些活化的T淋巴细胞中。在许多恶性肿瘤中，CD56表达缺失与肿瘤具有易转移因素和患者的预后不好有联系。有研究表明，当甲状腺滤泡上皮发生恶变时，CD56表达会缺失【9】。在227例PTC组织中，CD56阳性表达仅占3.08%，显著低于结节性甲状腺肿的98.80%（=36.39，P<0.05），且以弱阳性7（100%）为主。该指标对于PTC与结节性甲状腺肿的鉴别诊断有重要意义。
　　综上所述，在甲状腺乳头状癌的临床病理诊断工作中，应以病理学光镜诊断为基础，同时联合免疫组织化学标记，以提高诊断的敏感度及特异性。其中Galectin-3、 CK19、 HBME-1、AAT作为标记甲状腺乳头状癌的可靠阳性指标，具有辅助诊断的意义，而CD56则作为阴性指标，用于鉴别诊断。
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