慢性HBV感染患者机体免疫状况检测分析
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【中图分类号】R511 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)12－0282－01
【摘要】目的：检测分析慢性HBV感染患者机体免疫状况对于HBV DNA水平及HBsAg的影响。方法：选择我院2009年2月至2011年2月90例慢性HBV感染患者，按照疾病严重程度，分为观察组A（慢性重症肝炎）、观察组B（慢性乙型肝炎）和观察组C（肝硬化），各30例，分别采取ELlSA试验和流式细胞仪进行全血及血清的细胞因子白细胞介素2（IL-2）、IL10、HBV－M、淋巴细胞亚群的CD4+、CD8+T细胞检测，采取PCR试验对HBV DNA进行检测，观察分析检测的结果。结果：观察组A和观察组C的IL-2、IL-10、淋巴细胞亚群的CD4+、CD8+T细胞与HBsAg、HBV DNA检测结果之间无明显相关（P＞0.05），无统计学意义。观察组B的淋巴细胞亚群的IL-2、CD4+T细胞与HBV DNA之间呈现负相关（r=0.194，-0.566，P=0.001），具有统计学意义。观察组B的IL-10、淋巴细胞亚群的CD8+T细胞与HBV DNA检测结果之间无明显相关（r=0.213，0.323， P=0.405），无统计学意义。结论：慢性HBV感染患者不同疾病类型的机体免疫状况对于HBsAg、HBV DNA有不同的影响，慢性乙型肝炎的淋巴细胞亚群的CD4+T细胞对HBsAg、HBV DNA有明显的抑制作用。
【关键词】慢性HBV感染 机体免疫状况 HBV DNA水平 HBsAg
HBV 引起的慢性肝病其发病机制目前仍未明确，临床上一般认为，HBV 感染与机体的免疫功能变化有一定的相关性，本文通过检测分析慢性HBV感染患者机体免疫状况对于HBV DNA水平及HBsAg的影响，总结如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择我院2009年2月至2011年2月90例慢性HBV感染患者，男51例，女39例，年龄在24~52岁，平均年龄为37.8±0.7岁，均符合2000 年中华医学会在西安会议上修订的《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准，按照疾病严重程度，分为观察组A（慢性重症肝炎）、观察组B（慢性乙型肝炎）和观察组C（肝硬化），各30例，分别采取ELlSA试验和流式细胞仪进行全血及血清的细胞因子白细胞介素2（IL-2）、IL10、HBV－M、淋巴细胞亚群的CD4+、CD8+T细胞检测，采取PCR试验对HBV DNA进行检测，观察分析检测的结果。三组患者从年龄、性别等方面对比无显著差异（P＞0.05），具有可比性。
1.2 仪器与试剂 （1）HBV－M、IL-2、IL10检测：采用上海实业科华生物技术有限公司提供的试剂盒，酶标仪，Wdlsean洗板机（Labsystems提供，型号：MK ）；（2）CD4+、CD8+T细胞检测：流式细胞仪（型号：EPICS XL）、软件SYSTEMII；（3）HBV DNA检测：采用洛阳华美生物工程公司提供的试剂盒，电泳仪（EPS300），单槽式扩增仪（型号：黑马8000）。
1.3 方法
1.3.1 样本采集与处理 在患者上臂采集3~5ml的静脉血，在37oC下进行全血孵化20分钟后，给予离心试验，选择2400r/min，离心10min后，分离取出上清液（血清），保存在-20oC下备用待测。
1.3.2 检测方法 （1）HBV－M、IL-2、IL10检测：进行酶联免疫吸附实验，即ELlSA试验，操作方法及 结果判断严格按试剂盒上的要求进行。（2）CD4+、CD8+T细胞检测：校准好光路及流路，保证所有荧光信号的变异系数(CV)均＜2%。异硫氰酸荧光素(FITC)为荧光I，藻红蛋白(PE)为荧光II，藻红蛋白-花青苷( PE-Cy5)为荧光IV，滤光片的波长分别是525、575、675nm，然后对荧光阴性的范围，即阴性对照进行确定，对PMT电压进行校准，对颜色进行补偿，对淋巴细胞的检测进行参数测定，平均每份标本可测定细胞个数为5000个，测定出来的数据均采用流式细胞仪及SYSTEMII软件进行分析。（3）HBV DNA检测：使用聚合酶链反应(PCR)技术进行试验，灵敏度在10-5μg/ml，在进行血清HBV DNA检测前，应先对样品进行制备，将血清从-20℃下取出，解冻后，取出100μl加入到10%的10μl的SDS及20mg/ml的蛋白酶K中，在37℃下放置过夜消化后，使用酚：氯进行仿抽提两次，再在-20℃下以无水乙醇进行沉淀，沉淀物应用20μl的TE进行溶解。将制备好的血清样品进行PCR试验，每次PCR操作均设置成阴性、阳性对照试验。 在紫外灯下对扩增结果进行判读，阳性标准为：样品出现的红橙色光带与阳性的对照处于同一水平的位置［1］。
1.4 统计学方法本组数据采用SPSS13.0统计学软件进行处理，组间比较采用系数r检验，以P<0.05为有统计学意义。
2 结果
观察组A和观察组C的IL-2、IL-10、淋巴细胞亚群的CD4+、CD8+T细胞与HBsAg、HBV DNA检测结果之间无明显相关（P＞0.05），无统计学意义。观察组B的淋巴细胞亚群的IL-2、CD4+T细胞与HBV DNA之间呈现负相关（r=0.194，-0.566，P=0.001），具有统计学意义。观察组B的IL-10、淋巴细胞亚群的CD8+T细胞与HBV DNA检测结果之间无明显相关（r=0.213，0.323， P=0.405），无统计学意义。见表1
表2 三组IL-2、IL-10、淋巴细胞亚群的CD4+、CD8+T细胞与HBsAg、HBV DNA检测结果的相关系数（r）比较
3 讨论
临床上一般认为，HBV 感染与机体的免疫功能变化有一定的相关性，若免疫功能正常时，能启动机体的免疫系统，清除体内的病毒，肝细胞仅出现短暂的损害，之后会快速被修复而自行康复；若免疫功能下降时，HBV感染时，机体无法产生免疫反应，出现免疫耐受，肝组织会出现轻微损害，若HBV长期在体内发生感染继发成慢性HBV感染，机体的免疫功能发生紊乱后，机体的免疫系统已经无法清除HBV，就会发生肝组织持续HBV感染，损伤肝细胞，发展为慢性肝炎［2］。本文中统计发现，慢性乙型肝炎的淋巴细胞亚群的IL-2、CD4+T细胞与HBV DNA之间呈现负相关（r=0.194，-0.566，P=0.001），表明在慢乙肝的患者机体中CD4+T 细胞能抑制HBV 的DNA复制，另外IL-2与HBsAg之间无明显的相关性，但与HBV DNA间有相关性，表明IL-2水平对HBsAg无影响，而对于HBV 的DNA复制有一定的抑制作用。
综上所述，慢性HBV感染患者不同疾病类型的机体免疫状况对于HBsAg、HBV DNA有不同的影响，慢性乙型肝炎的淋巴细胞亚群的CD4+T细胞对HBsAg、HBV DNA有明显的抑制作用。
参考文献
［1］ 梁志清，吴健林，吴继周等，慢性HBV感染不同临床类型机体免疫对HBsAg和HBV DNA 水平的影响［J］，江苏医学，2010，36（17）：1994-1995
［2］ 何英, 张允奇, 吴润香等，慢性乙型肝炎患者外周血T 淋巴细胞亚群变化与病毒复制的关系［J］，检验医学，2009，24(11)：808-811
作者单位：756000 宁夏固原市人民医院
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