三种大黄不同炮制品对大承气汤小鼠泻下作用比较研究
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摘要：研究生大黄、醋大黄和大黄炭的大承气汤对其泻下作用的差异性，将96只试验小鼠随机分为阳性对照组及空白对照组、生DCQ 6、10 g/kg剂量组、醋DCQ 6、10 g/kg剂量组和炭DCQ 6、10 g/kg剂量组，按20 mL/kg的剂量给药后，分别用代谢笼积分法、炭末推进作用及Na+-K+-ATPasc活性试验，比较生大黄、醋大黄和大黄炭的大承气汤对小鼠的正常泻下作用、炭末推进率及Na+-K+-ATPasc活性的差异。结果表明，生大黄、醋大黄和大黄炭对大承气汤的泻下作用的影响有差异，但其变化差异在一定程度上与生大黄、醋大黄和大黄炭存在着联系。生DCQ组、醋DCQ组和炭DCQ组与空白对照组及阳性对照组比较，其对正常小鼠正常泻下作用、炭末推进作用、抑制Na+-K+-ATPase活性的作用有差異，且给药组间比较，生DCQ组泻下作用的影响差异最显著。
关键词：大承气汤;大黄;泻下作用
中图分类号：R285.5 文献标识码：A
文章编号：0439-8114（2020）02-0128-05
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.02.028 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
Comparative study of three kinds of rhubarb processed products on the draining effect of Dachengqi decoction in mice
QIU Mei-yan1，WEI Jiang-cun1，2，ZHANG Ru3，XIE Zhen2，JIANG Xian-zai1，HAN Qian2，ZHAO Feng-xian2
（1.Guangxi International Zhuang Medical Hospital，Nanning 530201，China;2.Guangxi University of Chinese Traditional Medicine，
Nanning 530200，China;3.Guangxi Women and Children's Health Hospital，Nanning 530003，China）
Abstract： To study the difference of the purging effect of rhubarb， vinegar rhubarb and rhubarb charcoal on Dachengqi decoction， 96 experimental mice were randomly divided into positive control group， blank control group， DCQ 6，10 g/kg dose group， vinegar DCQ 6，10 g/kg dose group and carbon DCQ 6，10 g/kg dose group. The activities of rhubarb， rhubarb and Dachengqi decoction of rhubarb and rhubarb on normal diarrhea， propelling rate of carbon and Na+-K+-ATPasc activity in mice were compared. Results showed that the effects of rhubarb， rhubarb and rhubarb charcoal on the diarrhea of Dachengqi decoction were different， but the variation of Dachengqi decoction was related to rhubarb， rhubarb and rhubarb carbon. Compared with the blank control group and the positive control group， the DCQ group， the vinegar DCQ group and the carbon DCQ group had different effects on normal diarrhea， the propulsive effect of carbon end and the inhibition of the activity of Na+-K+-ATPase in normal mice， and the difference of the effect between the DCQ group and the DCQ group was the most significant. The effects of rhubarb， rhubarb and rhubarb carbon on the diarrhea of Dachengqi may be different， which may be related to the changes in the content of the main chemical composition of the radix dahuris， rhubarb and rhubarb charcoal.
Key words： Dachengqi decoction; rhubarb; purgative action
大承气汤始载于汉代张仲景的《伤寒论》和《金匮要略》，由大黄、枳实、厚朴和芒硝组成，是泻法的代表方剂[1]，其具有泻下热结的作用，主治阳明腑实证和里热实证等[2]。大黄性寒，味苦，具有泻下导滞、泻火凉血和活血祛瘀等作用[3]。厚朴性温，具有疏通气机、消除气滞等功效，适用于脾胃气滞所引起的腹胀、恶心呕吐、大便秘结或者泻而不畅等症[4]。枳实性寒，味苦，具有行气、散结、化痰的作用，在胃肠道疾病方面有较为广泛的应用[5]。芒硝善于荡涤肠胃湿热，燥结积滞，为苦寒攻下之要药，既能泻下，又能泄热[6]。大承气汤在临床上主要用于治疗急腹症、肠梗阻与胃肠道功能障碍等疾病，该方剂在辅助改善脑血管病人意识、有机磷农药急性中毒抢救等方面也有很好的疗效[7，8]。 大黄在大承气汤方剂中作君药，其安全性则由组成复方的中药决定，中药炮制后，药性改变，毒副作用降低[9]。厚朴在大承气汤方剂中作臣药，具有抗病原微生物和调整胃肠运动等作用[10]，大黄的泻下成分为蒽醌类，炮制工艺对大黄总蒽醌含量有一定的影响[11，12]，枳实中的黄酮类成分对胃肠道平滑肌、心血管系统、抗炎和利尿等均有一定的作用[13]。
大黄经过不同的方法炮制，其化学成分及其药效变化差异很大，甚至产生相反的药效[14]。本试验从大承气汤泻下作用入手，对生大黄、醋大黄和大黄炭的大承气汤泻下作用变化差异进行研究，探讨大黄不同炮制品的大承气汤泻下作用变化及其共性关系，为探讨大黄不同炮制品配伍藥效奠定基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 药材 生大黄、枳实、厚朴及芒硝购于广东康美药业有限公司，经广西中医药大学药用植物教研室李斌副教授鉴定，中药大黄为蓼科植物药用大黄（Rheum officinale Baill.）的干燥根和根茎，枳实为芸香科植物酸橙（Citrus aurantium L.）的干燥幼果，厚朴为木兰科植物厚朴（Magnolia officinalis Rehd. et Wils.）或凹叶厚朴（Magnolia officinalis Rehd. et Wils. var. biloba Rehd.et Wils.）的干燥干皮、根皮及枝皮，以上3味中药粉碎过10目筛。芒硝，中药名，经鉴定为硫酸盐类矿物芒硝族芒硝，为结晶体，主要含十水硫酸钠（Na2SO4·10H2O）。药材批号与产地见表1。
1.1.2 仪器 紫外分光光度计（日本岛津公司，UV-1800）;全波长酶标仪（美国，BIOTEK-Epoch，20110793）;育温箱（广东科力有限公司，PYX-190H-B）;代谢笼（安徽正华有限公司，ZH-B6）。
1.1.3 药物与试剂 酚酞片（批号：160702，山西亨瑞达制药有限公司）;超微量Na+-K+-ATP酶试剂盒（批号：20170322，南京建成生物工程研究所）;考马斯亮蓝蛋白试剂盒（批号：20170218，南京建成生物工程研究所）;生理盐水（批号：1610060721，辰欣药业股份有限公司）。
1.1.4 试验动物 广西医科大学实验动物中心提供清洁级昆明小鼠，体重（20±2） g，雌雄各半。动物质量合格证号：0001757，生产许可证号：SCXK桂2014-0002。
1.2 试验方法
1.2.1 试验药液提取 分别精密称定厚朴药材粉末24 g、枳实12 g、大黄12 g、芒硝9 g，厚朴与枳实加纯水500 mL，浸泡30 min后加热煮沸后保持微沸30 min，使用500目滤布过滤，剩下的药渣再加纯水500 mL后浸泡30 min，然后加热煮沸保持微沸30 min，再过滤，合并两次滤液，然后加入大黄粉末，浸泡20 min后再加热煮沸，保持微沸20 min，使用500目滤布过滤，药渣再加入纯水300 mL，加热煮沸后保持微沸20 min，过滤，合并滤液，趁热加入芒硝，搅拌使溶解，浓缩成浓度为0.3∶1的药液（含生药0.3 g/mL），置于2～8 ℃储存备用。生大黄的大承气汤、醋大黄的大承气汤、大黄炭的大承气汤分别标记为生DCQ、醋DCQ、炭DCQ。
1.2.2 对正常小鼠正常泻下作用的影响[15] 取健康昆明小鼠96只，体重为（20±2） g，雌雄对半，小鼠适应性喂养3 d后，随机分组，每组12只昆明小鼠，分为以下8组：（a）生DCQ 6、10 g/kg剂量组;（b）醋DCQ 6、10 g/kg剂量组;（c）炭DCQ 6、10 g/kg剂量组;（g）空白对照组;（h）阳性对照组（酚酞片60 mg/kg）。
试验当日小鼠禁食不禁水4 h，空白组去离子水灌胃，其余组均给予对应的给药剂量（6、10 g/kg），容积20 mL/kg。然后将小鼠单独放入代谢笼中（底下铺有滤纸），然后观察泻下作用，按粪便性状分为水便、溏便、软便、正常。水便和溏便为泻下，分别观察5 h内各组小鼠的泻下只数、各组小鼠首次泻下时间、5 h内泻下总次数和总排便次数，比较大黄不同炮制品的大承气汤对正常小鼠排便的影响差异。
1.2.3 对小鼠炭末推进作用的影响[15，16] 取健康昆明小鼠96只，雌雄对半，小鼠禁食不禁水24 h，按“1.2.2”的随机分组给药。按剂量6、10 g/kg（加入适当墨汁），容积20 mL/kg，墨汁作为指示剂，分别使用上述加入墨汁的药液灌胃给药，16 min后脱颈椎处死，解剖开腹，取出从幽门到回盲部的小肠（盲肠前端），按不加牵引地平铺于干净的玻璃板上，测量其全长和炭末前沿到幽门的距离，计算其与全长的百分比，即炭末推进率=炭末在肠内推进距离（cm）/小肠全长（cm）×100%。
1.2.4 对小鼠结肠壁细胞Na+-K+-ATPase活性的影响[17，18] 取健康昆明小鼠96只（20±2） g，雌雄对半，按“1.2.2”的随机分组给药，连续灌胃给药6 d。在第6天灌胃给药30 min后颈椎脱臼处死，马上从回盲部下端剪取结肠，用预冷的去离子水反复清洗肠腔内外血液和粪便，用滤纸稍微吸干，精确称取0.2 g，然后加入生理盐水1.8 mL，使用匀浆机，制备成10%质量分数的匀浆液，2 500 r/min离心10 min，取上清液0.2 mL加入0.8 mL生理盐水稀释成2%体积比的匀浆，所得匀浆液在595 nm处，使用超微量Na+-K+-ATPase试剂盒和考马斯亮蓝蛋白试剂盒测定其吸光度A，并计算样本的蛋白质浓度（gprot/L）和ATPase活力（U/mgprot）。 1.2.5 统计学处理 数据使用 SPSS 21.0统计学软件处理，数据以X±s的形式表示，采用单因素方差分析用来比较组间差异显著性，P<0.05时有显著性差异，P>0.05时无显著性差异。
2 结果与分析
2.1 对正常小鼠正常泻下作用的影响
由表2可知，阳性对照组及生DCQ 6、10 g/kg剂量组、醋DCQ 6、10 g/kg剂量组、炭DCQ 6、10 g/kg剂量组5 h内泻下次数均多于空白对照组，差异极显著（P<0.01）。阳性对照组及生DCQ 6、10 g/kg剂量组、醋DCQ 6、10 g/kg剂量组、炭DCQ 10 g/kg剂量组5 h内总排便次数明显多于空白对照组，差异极显著（P<0.01）;炭DCQ 6 g/kg剂量组5 h内总排便次数多于空白对照组，差异显著（P<0.05）。
醋DCQ 6、10 g/kg剂量组、炭DCQ 6、10 g/kg剂量组首次泻下时间极显著高于生DCQ剂量组（P<0.01）。醋DCQ 6、10 g/kg剂量组、炭DCQ 6、10 g/kg剂量组5 h内泻下次数极显著少于生DCQ剂量组（P<0.01）。醋DCQ 6、10 g/kg剂量组、炭DCQ 6、10 g/kg剂量组5 h内总排便数均极显著少于生DCQ剂量组（P<0.01）。表明大黄不同炮制品的大承气汤首次泻下时间、5 h内泻下次数及5 h内总排便数有差异性。
2.2 对小鼠炭末推进率的影响
由表3可知，阳性对照组及生DCQ 6、10 g/kg剂量组、醋DCQ 6、10 g/kg剂量组、炭DCQ 6、10 g/kg剂量组炭末推进率极显著高于空白对照组（P<0.01）。
醋DCQ 6 g/kg剂量组、炭DCQ 6、10 g/kg剂量组炭末推进率极显著低于生DCQ组（P<0.01）;醋DCQ 10 g/kg剂量组炭末推进率显著低于生DCQ组（P<0.05）。表明大黄不同炮制品的大承气汤炭末推进率有差异性。
2.3 对小鼠结肠壁细胞Na+-K+-ATPase活性的影响
由表4可知，阳性对照组及生DCQ 6、10 g/kg剂量组、醋DCQ 6、10 g/kg剂量组、炭DCQ 10 g/kg剂量组ATP酶活力极显著低于空白对照组（P<0.01）;炭DCQ 6 g/kg剂量组ATP酶活力显著低于空白对照组（P<0.05）。
醋DCQ 10 g/kg剂量组、炭DCQ 6、10 g/kg剂量组ATP酶活力极显著低于生DCQ组（P<0.01）;醋DCQ 6 g/kg剂量组ATP酶活力显著低于生DCQ组（P<0.05）。表明大黄不同炮制品的大承氣汤其ATP酶活力有差异性。
3 小结与讨论
通过与空白对照组、阳性对照组及生大黄、醋大黄和大黄炭的大承气汤组进行比较，探讨生大黄、醋大黄和大黄炭的大承气汤的泻下作用变化差异，为大黄不同炮制品对大承气汤影响的物质基础的研究奠定基础。根据相关文献[19]与结合预试验确定给药剂量;酚酞为常用泻药，是临床上常用于治疗便秘的药，能用于正常泻下之用，价格便宜且疗效明显，故本试验选择酚酞作为阳性药。
由表2、表3、表4可以看出，生DCQ组、醋DCQ组和炭DCQ组与空白对照组及阳性对照组比较，其对正常小鼠正常泻下作用、炭末推进作用、抑制Na+-K+-ATPase活性的作用均有差异性，且给药组间比较，生DCQ组泻下作用的影响的差异最显著，其他给药剂量6、10 g/kg组均有显著差异。刘沛等[20]报道大承气汤的泻下功效与总蒽醌成分有关，与空白对照组比较，生DCQ组、醋DCQ组和炭DCQ组对正常小鼠泻下作用、炭墨推进功能和Na+-K+-ATPase活性抑制率都具显著性。大黄与部分药物配伍后大都会引起蒽醌类成分含量的降低，有研究报道[21]，大黄蒽醌类成分对肝肾存在一定的毒性，由此推断，大黄药对配伍后蒽醌类成分含量降低则减轻了大黄的毒性作用，但两者的相关性有待进一步研究验证。
芒硝的作用是增加方剂中大黄化学成分的溶出，增强其泻下功效，对新成分的生成基本上没有影响[22]。目前，中药方剂主要研究的是在方剂配伍过程中是否有新成分的产生或某些成分的消失，是否由于新成分的产生或某些成分的消失才表现出方剂的特有疗效，而中药方剂中的君药使用不同的炮制品，是否对其方剂也有类似于相同或相反的规律。中药方剂在配伍过程中各成分的含量变化，是否由于方剂中各种化学成分的协同作用或拮抗作用而产生中药方剂独特的疗效[23]。
从现代科学的观点来分析，中药复方的组合效应实际上即指药物化学成分之间的物理效应和化学效应。物理效应是指药物化学成分的电子之间相互影响，使药物化学分子的极性和磁性发生变化，甚至使分子结构发生改变，从而诱导各种化学反应产生。此外，电子间的相互作用还影响药物化学成分的物理性质，如溶解降低产生沉淀，吸附作用使颜色发生改变，小分子溶入大分子或排挤大分子与其他分子的作用等[24，25]。
综上所述，中药复方是由多种活性成分组成。多种活性成分分别作用于机体的不同器官和不同靶点，相互协同，对机体从生理、病理上进行调理，经整合调节而发挥复方的综合疗效。所以必须将中药复方作为一个有机的整体进行研究。不仅只局限于其中的某一个单味中药，而应注意考虑多种活性成分的协同作用。此外，复方药效不仅与药效物质或药效物质群，而且与辅助成分也有关。
方剂药效物质基础的复杂性决定了应当从中医药理论自身固有的规律性出发，着重强调在以系统论、整体论为主的方法论的指导下，使用整体综合与还原分析相结合的研究方法，采用多样化的思路和手段进行研究，尤其应当注意那些以前用分析还原思维研究这一复杂问题时忽视、遗漏或丢弃的东西。 目前，关于中药方剂配伍化学成分的研究，大体上是在配伍前后方剂中个别化学成分的定量分析、方剂配伍后成分的含量变化以及配伍后多成分定量分析研究[26-30]，而在中药方剂的药效物质基础上有所突破，这就要冲破目前研究方剂所固有的方法和思维模式，需要具有创新性的方法和思维进行深入的研究。
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收稿日期：2019-04-03
基金项目：国家自然科学基金项目（81360524）;广西高校中药提取纯化与质量分析重点实验室（桂教科研〔2014〕6号）;国家中医药管理局科研
三级实验室中（壮）药化学与质量分析实验室（国中医药发2009[21]号）
作者简介：邱美雁（1986-），女，广西贵港人，主管中药师，主要从事中药学相关研究，（电话）18177479182（电子信箱）326577249@qq.com;
通信作者，张 如（1984-），女，主管中药师，主要从事中药饮片、中成药处方调配核对工作以及中药质量标准研究，
（电子信箱）284978283@qq.com。
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