饲料中总磷测定注意事项
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作者:马林杰
摘要：对饲料中总磷测定的关键点，炭化-灰化处理、定容、分光光度操作等过程进行了论述，提高检测准确度。
关键词：炭化-灰化 分光光度 准确度
Points for Attention in the Determination of Phosphorus in Feed
Ma Linjie
（Hulunbuir Quality Measurement and Inspection Institute）
Abstract： In this paper， the key points of determination of total phosphorus in feed， carbo nization-ashing treatment， constant volume， spectrophotometric operation and other processes are discussed to improve the detection accuracy.
Key words： carbonization-ashing， spectrophotometry， accuracy
磷是动物体内含量最多的矿物元素之一，和钙一起构成骨组织和牙齿，其余大部分构成软组织成分，小部分存在于体液中，参与许多物质代谢过程，是细胞膜和血液中缓冲物质及RNA、DNA、辅酶的成分。
磷缺乏和过多均有危害。磷不足时会引起幼龄动物患佝偻症，成年动物患软骨症，表现为食欲不良，增重减缓，全身虚弱。磷过多时，易引起甲状旁腺机能亢进，造成骨组织营养不良，产生跛行和长骨骨折。
30%～70%的磷是以植酸盐的形式存在。动物性饲料中以鱼粉的含磷量最高，矿物性饲料中磷的利用效率也很高。补充磷的矿物质饲料有骨粉、磷酸氢钙、磷酸二氢钙等。
磷测定过程容易出现检测超出重复性和再现性要求，笔者通过严格控制每一操作细节，可以达到非常高的检测精确度、准确度。
1 实验仪器、材料
1.1 实验仪器
AL204电子天平[梅特勒-托力多（上海）有限公司];SX-12-10高温电阻炉（天津泰斯特仪器有限公司）;DB-3D电热板（天津泰斯特仪器有限公司）; 101-ZN数显敼风干燥箱（华北仪器有限公司）;T6新世纪紫外分光光度计（北京普析仪器有限公司）。
1.2 试验材料
饲料样品;硝酸;盐酸（1+1）;钒钼酸铵显色剂;磷标准溶液（50 μg/mL）
本试验中所有试剂均为分析纯AR及其以上试剂 实验用水的pH值范围和电导率应符合GB/T 6682—2008《分析实验室用水规格和实验方法》中三级水标准要求，试验所用溶液在未注明何种溶液时，均指水溶液。
2 试验方法
2.1 检测方法
GB/T 6437—2018《饲料中总磷的测定 分光光度法》中7.1.1干灰化法。
2.2 试验原理
试样中总磷经消解，在酸性条件下与钒钼酸铵生成黄色的钒钼黄[（NH4）3PO4NH4VO3·16MoO3]络合物，钒钼黄的吸光度值与总磷的浓度成正比，在波长400nm下测定试样溶液中钒钼黄的吸光度值与标准系列比较定量。
2.3 注意事项
（1）干灰化法：试样的称样量2.5 g左右，精确至0.0002 g，于电炉上（坩埚盖与坩埚间留有小缝隙，不要拿下盖）炭化，直至呈灰黑色，不冒烟。将坩埚及盖移入电阻炉中，最好是冷炉升温至550 ℃计时，一般灰化3 h，对于部分含矿物质较多，难灰化的样品要适当延长灰化时间，烧至呈灰黑色，无炭黑粒既可，一定要烧透烧完全，否则磷元素不能全部分解出来，造成检测结果偏低。
（2）灰化后的样品，加入浓硝酸和盐酸于电热板或电炉上，使用电炉时，用可调温电炉，或在其上放一块耐火板加热使其温度均匀平和，待液体加热微沸时，停止加热，利用余热慢慢加热，且不可大火，造成试液挥发损失过多而影响检测结果，更不可以烧干。
（3）在消煮过程中坩埚盖要凸面朝向坩埚（向下），这样挥发的液体又回落至坩埚，减少挥发损失。
（4）在试样测定过程中，移取液体量一定控制在磷含量50μg～750μg范围内（一般样液体积为1.0 mL～10.0 mL），可以根据明示的磷百分含量进行折算），过多或过少造成显色示值偏离分光光度计量程示值中心位置，引入的误差过大，影响检测结果，总之，测定时样液的吸光度示值尽量接近仪器量程中心位置。
（5）由于是显色反应，显色剂、样液的移取一定要准确无误，用精度较高的单标线吸管移取。
（6）要严格控制显色温度，温度高，显色时间可以短些，假如显色时温度为25 ℃，10 min就可以，若温度为15 ℃，显色时间要长些，因为温度决定达到反应最大值的速度，反应达到最大值后，时间长短对吸光度影响不大，但也不宜过长，一般不超过半小时，否则会影响检测结果。
（7）空白试验参与总磷含量计算，对误差的贡献同样大，因此空白要作平行试验，取平均值。
（8）样液的显色范围较大，为50μg～750μg，最好显色示值位于光度量程的中位值附近更准确，对一些特定检测，可先取一个中间体积，如5mL（一般样液体积为1.0 mL～10.0 mL）样液进行显色，确定浓度大小，再取样液进行测定。
3 结语
通过规范、控制炭化-灰化处理过程、定容、样液量、分光光度操作过程，以期达到提高检测准确度，满足检测重复性和再现性的要求。
参考文献
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[3] 飼料 采样GB/T 14699.1—2005[S]. 北京：中国标准出版社， 2005：03.
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