枸杞和茶花粉水提物对急性汞中毒小鼠肝肾的保护作用及机制研究
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【摘要】 目的 研究枸杞和茶花粉水提物对急性汞中毒小鼠肝肾的保护作用和机制。方法经颈部皮下注射Hg Cl2溶液建立小鼠急性汞中毒模型。枸杞茶花粉水提物的低、中、高 丶剂丶 量 组（2g/kg 4g/kg 8g/kg）均于每日同一时间灌胃给药，连续给药 7 d，同时设正常组小鼠（等体积生理盐水）。末次灌胃给药后小鼠禁食 12 h，测量小鼠体重，观察小鼠的生理情况，检测小鼠血清中血汞，同时测定血液、肝脏和肾脏中汞离子的含量，结果 与正常组小鼠比较，模型组小鼠体重显著下降，逐渐出现头痛、头晕、呕吐、腹泻、乏力、寒战、发热（38～39℃），烦躁不安、失眠甚至抽搐、等癥状，检测小鼠血清中血汞（15μg/100 ）肝脏、肾脏中汞离子含量低剂量组无明显降低，中，高剂量组降低幅度不大。结论 枸杞和茶花粉水提物对急性汞中毒小鼠不具有良好的排汞作用，且作用效果与给药剂量不呈正相关。
【关键词】枸杞 松花粉 氯化汞 排汞 修复 氧化损伤
金属汞蒸气的大量吸入是引起急性中毒的主要途径。汞蒸气吸入后，有75%～80%通过肺泡进入血液，分布全身，以脑、肾、肺贮汞量最多，贮存时间较久。金属汞本身不能通过血脑屏障和胎盘，但进入血液后，汞会被氧化成二价汞离子，与血浆蛋白或含硫氨基酸结合进入脑组织和胎盘。汞与蛋白质巯基有特殊亲和力，与酶的巯基结合使一系列含巯基酶的活性受抑制，造成机体的代谢障碍，特别是中枢神经系统和自主神经的功能受到损害。汞化合物可经消化道和皮肤黏膜迅速吸收，在消化道的吸收率与其在水及胃液中的溶解度有关。吸收后在血液中主要与血浆蛋白结合，小部分与血红蛋白结合，随血液分布于各脏器。以肾脏含量最高，80%的汞蓄积在。肾脏的近曲小管，引起肾小管上皮细胞肿胀坏死，汞离子与酶结合后，使酶活性丧失，影响细胞功能，造成中枢和自主神经系统功能紊乱以及肾、消化道损害。儿童金属汞中毒的临床表现与汞暴露途径、剂量和时间关系密切， 心、肺、肝、肾、脾、皮肤和淋巴结的损伤表现与成人金属汞中毒相似， 但对脑和神经系统的损害较为突出， 严重者可损害视力、听力， 甚至影响体格和智力发育，口服升汞（主要成分为氯化汞）中毒量为0.1g，成人致死量为0.3～0.5g，小儿致死量为0.1g。氧化汞的致死量为1～1.5g。甘汞（主要成分为氯化亚汞）致死量为2～3g.汞及其化合物能通过多种途径对机体产生以神经性、肝脏和肾脏毒性为主的多系统损害。汞污染已成为一个全球性污染问题， 随着汞及其化合物的污染问题日益严重， 如何预防及治疗汞及其化合物对机体的毒性作用显得极其重要。枸杞为茄目茄科枸杞属植物，是当前最常见的药用种类，具有滋补肝肾、益精明目、润肺 等功效。现代医学研究发现，枸杞子在降糖、降脂、抗肿瘤、抗氧化活性、抗动脉粥样硬化、增强免疫力方面均有不错的效果。而茶花粉则是近来引起广泛关注的药食兼用的滋补品，富含维生素C、E，并可提高 机体超氧化物歧化酶（SOD）含量，可拮抗脂质过氧化损伤，具有较强的抗氧化活性和保肝作用。但目前对枸杞和花粉水提物具有减弱汞毒性的作用的研究较少。故研发安全、有效的汞中毒防治药物具有深远的意义。该实验通过腹腔注射HgCl2溶液建立小鼠急性汞中毒模型，研究枸杞和茶花粉水提物对急性汞中毒小鼠肝肾的保护作用和机制， 以期为枸杞和花粉水提物预防和治疗急性汞中毒提供科学依据。首先我们会对枸杞和茶花粉混合配制成水提物，以得最佳效果。实验内容主要包括四个部分，分别为预实验、枸杞和茶花粉混合配制成水提物、小鼠染汞模型建立实验、分组对比实验观察、枸杞和茶花粉水体物对小鼠肝肾的保护作用总结。
一、材料与方法
（一）预实验
分别取0.05%，0.1%，0.15%浓度的氯化汞对小鼠进行急性汞中毒的预实验。
取18只小鼠分三组。
对三组小鼠以不同浓度的氯化汞经颈部皮下注射0.5mg/kg bw，连续3d。
观察小鼠的生理活动情况，通过观察找出最有效的浓度为0.1%。
（二）枸杞和茶花粉混合配制成水提物
首先取25g枸杞和25g茶花粉，然后加入500mL去离子水。 85℃提取3h，离心取上清液，提取2次;合并上清液，浓缩、冻干即得枸杞和茶花粉水提物。
（三）小鼠染汞模型的建立
取年龄相同、体重接近、相同品种的健康KM小鼠40只，将小鼠适应性饲养1周，对其中30只小鼠进行染汞模型的建立，以氯化汞经颈部皮下注射0.5mg/kgbw，连续3d，建立急性汞中毒模型。另外10只小鼠注射等量的生理盐水溶液。为确保建模的准确性，在建模的过程中，小鼠逐渐出现头痛、头晕、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、乏力、全身酸痛、寒战、发热（38～39℃），严重者情绪激动、烦躁不安、失眠甚至抽搐、昏迷或精神失常等症状则说明建模成功。
（四）分组实验及给药
首先将40只实验小鼠随机分为四组每组10只，分别为对照组、实验组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）分组后将其都置于同一环境下实验培养，实验预期7d;保持室温（24±2）℃，相对湿度（45±3）%，每日光照12h。
空白组：不作任何处理，正常饲养，观察小鼠的生理活动情况，并做好记录。
对照组：每天早晚灌胃等量的生理盐水，观察小鼠的生理活动情况，并做好记录。
低剂量组：每天早晚灌胃提取物各一次，每次剂量为2g/kg，观察小鼠的生理活动情况，并做好记录。 中剂量组：每天早晚灌胃提取物各一次，每次剂量为4gkg，观察小鼠的生理活动情况，并做好记录。
高剂量组：每天早晚灌胃提取物各一次，每次剂量为8g/kg，观察小鼠的生理活动情况，并做好记录。
（五）实验动物指标测定
末次灌胃给药后各组小鼠禁食12h， 收集12h的尿液用于测定尿汞，LDH和ALP的含量或活性，在此期间停止食物供应，但给予去离子水喂养。尿液收集12h后，用乙醚麻醉小鼠，将小鼠以仰卧位固定在手术操作台上，剪开腹部皮毛，然后腹主动脉取血，静置1h，以3000r/min离心10min，分离得到血清，用于测定血汞、测定血液、肝脏和肾脏中汞离子的含量。
二、结果
对照组小鼠的体重增高，血汞，肝脏中的汞离子，尿汞，LDH，ALP都在正常值里波动，低剂量组小鼠的体重下降明显，测得血汞，肝脏中的汞离子含量高，尿汞和LDH，ALP的含量高。中剂量组小鼠体重基本保持稳定，血汞和肝脏中的汞离子含量偏高，尿汞，LDH，ALP，的含量也偏高，高剂量组小鼠的体重下降，血汞，肝脏中的汞离子，尿汞，LDH，ALP，的含量高于正常值。
三、讨论
本实验是以急性汞中毒的小鼠来探讨枸杞和茶花粉的水提物是否有抗氧化和保护肝脏的作用。宁夏枸杞Lycium barbarum L.是一种药食同源的名贵植物， 属于茄科枸杞属落叶灌木， 主要分布于我国的西北地区， 具有很高的药用和食用价值。宁夏枸杞是唯一载入2010年版《中国药典》的枸杞品种，其中，其根，茎，叶，花，果实都有很好的保健效果，具广泛的药理作用，有抗氧化性，抗肿瘤，保肝，神级保护等功能，而蜂花粉是蜜蜂从植物花药上采集花粉并添加了少量唾液后加工而形成的饼状物[11]， 素有“天然营养库”之称。已有研究表明蜂花粉中含有250多种物质， 包括脂质 （甘油三酯） 、脂肪酸、氨基酸、维生素、矿物质 包括脂质 （甘油三酯） 、脂肪酸、氨基酸、维生素、矿物质、酚类以及类黄酮等物质， 具有抗氧化、抑菌、抗病毒、抗炎以及增強免疫力等功效。因此， 蜂花粉作为传统药物和保健食品已经得到广泛应用。茶花粉是蜂花粉的一种， 主产于中国， 因其具有味甜可口、气味清香等特点， 深受消费者的青睐。Kao等的研究发现， 茶花粉具有较强的抗氧化活性， 并含有多种酚类及黄酮类化合物，并含有多种酚类及黄酮类化合物， 如没食子酸、阿魏酸、咖啡酸、儿茶素和芦丁等。Yildiz等[13]证明天然食物中的多酚和黄酮类物质与其保肝的活性有关， 但是到目前为止， 关于茶花粉保肝功效的研究鲜见报。而国内外还没有很多对枸杞茶花粉水提物作用的研究。
本实验的结果表明枸杞和茶花粉的水提物对急性汞中毒小鼠的抗氧化和保肝作用不明显。
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