体外扩增法检验尿道炎患者尿液中沙眼衣原体DNA的研究
来源:用户上传
作者: 赵琪林
【摘要】目的：探讨体外扩增法检验尿道炎患者尿液中沙眼衣原体DNA的情况。方法：选择我院100例尿道炎患者作为研究对象，分别采用体外扩增法及酶联免疫吸附法进行检测，比较两种检测方法的敏感性和特异性。结果：100例尿道炎患者尿液标本检出PCR阳性53例，阳性率53.0%，ELISA法检出阳性率46.0%，体外扩增法检测的阳性率高于ELISA法检出阳性率。采用体外扩增法检测的敏感性为91.3%（42/46），明显高于采用ELISA法检测的敏感性为79.2%（42/53），但特异性为79.6%，低于采用ELISA检测的特异性（91.5%）。采用体外扩增法检测的假阳性率为20.4%， 假阴性率为8.70%，χ28.782，P<0.05。结论：体外扩增法检验尿道炎患者尿液中沙眼衣原体的敏感性高。
【关键词】体外扩增法；尿道炎；尿液；沙眼衣原体；DNA
【中图分类号】R374【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2011）08-0062-01
Examination of in vitro amplification of Chlamydia trachomatis urethritis urine DNA research
Zhao Qilin
【Abstract】Objective：To investigate the in vitro amplification testing of Chlamydia trachomatis urethritis urine DNA situation. Methods Choose from 100 cases of patients with urinary infection as the research object, were used to expand in vitro method and elisa method for testing, to compare the two detection method sensitivity and specificity. Results 100 cases of patients with urinary infection urine specimens detection PCR positive 53 cases, positive rate 53.0%, ELISA detected 46.0% positive, expand in vitro method to detect the positive rate of higher than ELISA detection were positive. In vitro expansion method to detect the sensitivity of 91.3% （42/46）, much higher than the ELISA detection sensitivity of 79.2% （42/53）, but a specificity of 79.6%, below the specificity of detection by ELISA （91.5%）. The expand in vitro method to detect the false positive rate 20.4%, false negative rate is 8.70%, and the χ28.782, P<0.05.Conclusion In vitro amplification testing of urine Chlamydia trachomatis urethritis patients more sensitive.
【Key words】in vitro amplification of DNA of Chlamydia trachomatis urethritis urine
沙眼衣原体（chlamydia trachomatis，Ct）与人类性传播疾病的发病关系密切，已成为常见的病原体之一。PCR技术不但能检测尿道或宫颈拭子标本，而且可以采用尿标本进行检测[1]。本研究旨在探讨体外扩增法检验尿道炎患者尿液中沙眼衣原体DNA的情况，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料：选择我院2008年4月-2010年4月的门诊及住院的尿道炎患者100例作为研究对象，均为男性，年龄18-48岁。患者的典型表现是尿道刺痒83例、尿频、尿急、尿痛40例和排尿困难36例、阴囊下坠感29例、其他如性欲减退，个别患者出现阳痿20例。所有患者均排除淋菌性感染，皆未应用过抗生素进行治疗。
1.2 标本的采集：取尿道分泌物（应略带黏膜），用窄头的无菌棉拭子插入尿道口1～2cm，停留十余秒钟，轻轻旋转采集标本。将试子置含0.5ml生理盐水的EP管中搅拌后，弃拭子，送含分泌物的EP管检测。尿液标本为晨尿或相隔2h 以上未排尿的首段尿10～15ml，3000r/min离心15min ,弃去上清液,留取沉淀物检测。
1.3 体外扩增法：包括引物合成、DNA模板的提取与制备、及反应条件。其中引物合成依据文献涉及引物。正向引物sense:5’-GGACAAATCGTATCTCGG-3’,反向引物antisense:5’-GAAACCAACTCT- ACGCTG-3。引物合成采用DNA自动合成仪,预期扩增片段为517bp。PCR检测试剂盒为中山医科大学达安基因股份有限公司产品，操作严格按试剂盒说明书进行，仪器为美国PE-5700型PCR扩增仪，反应结束后，由电脑自动分析计算结果。 电泳结果判定：取10μl扩增产物作1.5%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，置紫外透射仪中观察。每次检测设阴性对照和阳性对照。在约517bp，观察到特异性扩增条带，则判断为阳性，反之阴性。
1.4 酶联免疫吸附试验：将沙眼衣原体抗体致敏聚苯乙烯小珠或包被微量板孔，捕获标本中的沙眼衣原体抗原，通过酶联显色反应而判断结果。
1.5 统计学分析：采用SPSS 11.0统计学软件进行分析， 采用卡方检验，P<0.05表明差异有统计学意义。
2 结果
2.1 体外扩增法检测结果分析：100例尿道炎患者尿液标本检出PCR 阳性53例，扩增产物均在517bp处观察到特异性的扩增条带，阳性率为53.0%（53/100）， ELISA法检出阳性率则为46.0%（46/100），体外扩增法检测的阳性率高于ELISA法检出阳性率。
2.2 两种检测方法的灵敏度和特异性比较:采用体外扩增法检测的敏感性为91.3%（42/46），明显高于采用ELISA法检测的敏感性（79.2%,42/53），但特异性为79.6%（43/54），低于采用ELISA检测的特异性（91.5%,43/47）。采用体外扩增法检测的假阳性率为20.4%（11/54），假阴性率为8.70%（4/46），χ28.782，P<0.05。
3 讨论
PCR作为一种体外基因扩增技术，这是一种体外扩增特异DNA片段的方法，是利用目的特异性引物在聚合酶的作用下，以四种单核苷酸为底物，在体外短时间内将模板DNA的一个区段进行几何级数的扩增，具有敏感、快速、特异、无放射性等优点，该技术目前已得到了非常广泛的普及和应用[2]。
沙眼衣原体核酸扩增技术的可用清晨首次尿（或禁尿4h后的首次尿）作为标本。据报告，男性尿液标本以PCR或LCR作沙眼衣原体检测，敏感性为93.5%～100%，特异性为99.1%～100%。由于尿液取材方便，对患者无侵害，因此这种方法适合于在不同人群中进行大规模筛查，也适合于边远地区标本采集后运送至中心实验室进行检测[4]。
酶联免疫吸附实验诊断沙眼衣原体感染的敏感性与直接免疫荧光法相当，而特异性稍有不如（90%左右）。试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故。该检测方法的显著优点是自动化程度高，可同时检测大批量标本，结果判断客观性强。本研究结果显示，体外扩增法检验尿道炎患者尿液中沙眼衣原体的敏感性高。
参考文献
[1] 高省，陈祥生.沙眼衣原体分子流行病学研究进展.国外医学皮肤行病学分册，2004，30（6）：402～404
[2] 李忠玉，吴移谋，陈超群.沙眼衣原体主要外膜蛋白在大肠杆茵中的表达与鉴定[J].中华皮肤科杂志,2004，37（12）：709～711
[3] 王强.处长虹，王楷.沙眼衣原体所致非淋茵性尿道炎患者血清IL-8、INF-a的检测[J].中国艾滋病性病，2003,9（2）：67～68
转载注明来源:https://www.xzbu.com/2/view-554909.htm
