子宫内膜癌组织中COX-2和MMP-9的表达及临床意义

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　　【摘要】 目的 探讨COX-2和MMP-9在人子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法 应用免疫组化SABC法检测45例人子宫内膜癌组织中COX-2和MMP-9的表达,并以30例正常子宫内膜组织作为对照。对COX-2和MMP-9的表达采用平均光密度测定,并对临床相关资料进行统计学分析。结果 子宫内膜癌组织中COX-2和MMP-9的平均光密度值(OD)为(19.85±7.34)和(18.81±7.56)显著高于正常子宫内膜组织的表达[(12.49±4.87)和(11.46±4.82),P<0.01],癌组织中COX-2和MMP-9的表达与性别、年龄、部位、组织类型、分化程度无相关性,而与肿瘤直径、TNM分期、淋巴转移、远处转移相关(P<0.05),同时经相关性分析发现在子宫内膜癌组织中,COX-2与MMP-9表达有显著相关性(γ=0.473,P=0.005,γ=0.437,P=0.001)。结论 COX-2可能诱导MMP-9 的表达而促进肿瘤血管的生成和侵袭转移。
　　【关键词】子宫内膜癌;COX-2;MMP-9
　　
　　DOI:10.3760/cma.j.issn 1673-8799.2010.06.68
　　作者单位:454100河南省焦作市第二人民医院病理科
　　
　　子宫内膜癌是妇科中较常见的肿瘤,近年来,发病率有所增加,主要症状是阴道不规则流血伴下腹疼痛,平均年龄大约55岁,75%~80%的病例发生在绝经后。大量的研究表明,环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在多种肿瘤组织中高表达,与肿瘤发生、发展、侵袭和转移密切相关[1,2]。基质金属蛋白酶-9(matrixMet allo-Pro-teinase-9,MMP-9)为锌依赖性内肽酶,能降解细胞外基质(extracellular matrix,ECM)。本研究通过检测子宫内膜癌组织中COX-2和MMP-9的表达,分析子宫内膜癌组织中COX-2和MMP-9的相关性,进而探讨COX-2在子宫内膜癌组织血管生成和侵袭转移中的作用。
　　1 材料和方法
　　1.1 材料 45例子宫内膜癌标本均为本院病理科2007年1月至2009年10月手术切除标本。年龄23~76岁,平均56岁。其中,高中分化34例,低分化11例。TNM分期采用国际抗癌联盟(UICC)第5版TNM分期法[4],Ⅰ期6例,Ⅱ期6例,Ⅲ期13例,Ⅳ期20例。SABC免疫组化检测试剂盒购于武汉博士德公司,一抗鼠抗人 COX-2 单克隆抗体和鼠抗人MMP-9单克隆抗体均为 SANTA CRU2 Biotechnology lnc产品,购于北京中山生物技术有限公司。
　　1.2 方法
　　1.2.1 免疫组化 标本经甲醛固定,石蜡包埋、4 μm连续切片。应用免疫组化SABC法检测。以磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution,PBS)代替一抗作阴性对照,用随试剂所附已知阳性对照片作阳性对照。
　　1.2.2 判定标准 免疫组化染色结果利用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告分析系统(武汉千屏影像工程公司)进行平均光密度测定,将免疫组化染色结果转化为平均密度值进行定量分析。每张切片胞浆、核膜呈棕黄色者为阳性细胞,先在低倍镜下全面观察,随后于200倍光镜下,随机观察5个视野,并拍片,计算阳性细胞的平均光密度,取其平均值为免疫组化测定结果。
　　1.3 统计学分析 所有资料均采用SAS软件进行统计学分析,组间显著性检验采用单因素方差分析(ANOVA),组间多重比较采用Scheffe法,蛋白表达之间的相关分析采用Pearson法,P<0.05为差异有显著性。
　　2 结果
　　2.1 子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织 COX-2 和MMP-9的表达
　　45例子宫内膜癌组织中,COX-2 的平均光密度值(OD)为(19.85±7.34),阳性染色主要位于肿瘤的胞浆内,棕黄色颗粒弥漫性分布于整个胞浆或沿核膜周边呈线性分布,癌周的粒细胞、血管内皮细胞可见少量表达。30例正常子宫内膜组织COX-2的平均光密度值(OD)为(124.9±4.87),子宫内膜癌组织COX-2平均光密度值显著高于正常子宫内膜组织(t=-55.6,P<0.01)。
　　45例子宫内膜癌组织中,MMP-9的平均光密度值(OD)为(18.81±7.56),阳性细胞主要为胞浆内有棕黄色颗粒。子宫内膜癌MMP-9 平均光密度值显著高于正常子宫内膜组织,差异有显著性(P<0.01)。子宫内膜癌组织中 COX-2和MMP-9的表达与年龄、性别、部位、组织类型不相关(均P>0.05),而与肿瘤直径、淋巴转移、远处转移和TNM分期相关(均P<0.05);COX-2和 MMP-9的表达随着TNM分期而逐渐升高,且具有显著差异性。
　　2.2 COX-2和MMP-9之间的相关性 对子宫内膜癌组织中 COX-2和MMP-9蛋白表达的平均光密度值进行分析,结果显示COX-2 与 MMP-9 之间呈显著正相关(γ=0.437,P=0.001)。
　　3 讨论
　　近年来大量的流行病学观察表明,长期大量服用非甾体类消炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAID)s的成人,其结肠病发病率下降 40%~50%。分析其机制可能是由于花生四稀酸代谢过程中主要的限速酶环氧化酶-(2Cyclooxygenase-2)受到抑制。COX-2在正常组织细胞中多不表达或低表达,但在炎症、肿瘤情况下,细胞受诱导而大量表达COX-2[3,4]。COX-2主要通过抑制细胞凋亡,抑制机体免疫功能,促进肿瘤组织血管形成,增加肿瘤的侵袭能力和促进癌变而参与肿瘤的形成、浸润和转移[5,6]。本研究结果显示,COX-2在子宫内膜癌组织中表达明显高于正常子宫内膜组织(P<0.01)并与子宫内膜癌的TNM分期、淋巴转移、远处转移和直径相关(P<0.05),在子宫内膜癌不同部位(子宫内膜底、子宫内膜体、子宫内膜窦)之间及不同病理类型、不同分化程度之间,其表达差异均无显著性(P>0.05),与文献报道一致[3,7]。
　　肿瘤发生浸润及转移时,必须先破坏细胞外基质,ECM是细胞脱落游走并发生浸润和转移的主要障碍。MMPs是一大类锌依赖性内肽酶家族,MMP-9是其中分子量最大的酶,它可以降解破坏ECM中的Ⅳ型、Ⅴ型胶原和明胶。本研究显示,MMP-9在子宫内膜癌组织呈现高表达,与子宫内膜癌旁正常子宫内膜组织相比差异具有显著性(P<0.01);其染色阳性癌细胞以癌巢的周边区域及侵袭最活跃的位置为主,提示MMP-9 参与了肿瘤的浸润;其表达与肿瘤直径大小、TNM分期、淋巴及远处转移相关(P<0.05),提示MMP-9参与了肿瘤的转移。
　　UEFUJI[8]研究发现,在子宫内膜癌患者中,COX-2过度表达者的(multives-sel disease,MVD)较COX-2表达不增高者的 MVD明显增加。特异性的COX-2抑制剂rofecoxib可使实验动物中的MMP-9蛋白水平明显下降[9],表明COX-2可诱导MMP-9的产生。本研究显示,COX-2与MMP-9呈显著正相关(γ=0.437,P=0.001),提示COX-2高表达诱导MMP-9表达升高,参与肿瘤的生长、浸润、转移。MMP-9参与的基质降解和再塑形成与肿瘤间质血管生成关系密切,可认为是血管生成激活的开关之一。

　　本研究显示COX-2和MMP-9在子宫内膜癌组织中存在共表达,其表达均显著高于正常子宫内膜组织,分析其原因是子宫内膜癌组织中COX-2高表达引起MMP-9高表达,MMP-9降解细胞外基质,共同促进肿瘤的生长、浸润和转移,应用选择性COX-2抑制剂治疗子宫内膜癌可能起到一定疗效。COX-2可能通过诱导MMP-9的表达而促进子宫内膜癌新生血管的形成和侵袭转移,但具体机制尚不清楚,需进一步研究证实。
　　参考文献
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