胃腺癌患者病变组织中PPARγ和PGC—1表达水平与临床病理特征的关系

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　　[摘要]目的 检测PPARγ与PGC-1在胃腺癌演变各阶段过程中的表达，探讨PPARγ和PGC-1在胃癌发生中的作用及其临床病理意义。方法 选择2011年1月～2016年9月荆州市第二人民医院收集的135例胃腺癌组织标本、52例正常胃黏膜组织标本以及19例慢性萎缩性胃炎、31例肠上皮化生、16例不典型增生等不同程度癌前病变组织标本。采用免疫组化方法，检测PPARγ、PGC-1在各组标本中的表达情况，分析正常胃黏膜、癌前病变、胃腺癌组织中PPARγ、PGC-1的阳性表达差异以及PPARγ、PGC-1表达之间的相关性，并分析其表达与胃癌病理特征的关系。结果 PPARγ及PGC-1在胃癌组织中的阳性表达率较癌前病变组织及正常胃黏膜组织中的表达降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。135例胃癌中，PPARγ与PGC-1的表达成显著正相关（r=0.956，P<0.05）；PPARγ、PGC-1阳性表达随着胃癌组织分化程度的降低而降低（P<0.05），PPARγ、PGC-1阳性表达与患者的Borrmann分型、Lauren分型、組织分化程度及TNM分期有关（P<0.05）。PPARγ、PGC-1阳性表达与患者的性别、年龄、淋巴结转移与否无相关性（P>0.05）。结论 PPARγ、PGC-1表达与胃癌发生、发展关系密切，检测PPARγ、PGC-1表达水平有助于预测胃癌的进展。
　　[关键词]胃腺癌；癌前病变；氧化物酶体增殖物激活受体γ；辅助活化因子1
　　[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2019）4（b）-0016-05
　　[Abstract] Objective To detect the expression of PPARγ and PGC-1 of the evolution of gastric adenocarcinoma in different stages， and to explore the role of PPARγ and PGC-1 in the development of gastric cancer and its clinicopathological significance. Methods From January 2011 to September 2016， 135 gastric adenocarcinoma tissue specimens， 52 normal gastric mucosa tissue specimens， 19 cases of chronic atrophic gastritis， 31 cases of intestinal metaplasia and 16 cases of atypical hyperplasia were collected from the Second People′s Hospital of Jingzhou City. The expression of PPARγ and PGC-1 was examined by immunohistochemical method. The difference of positive expression of PPARγ and PGC-1 in normal gastric mucosa， precancerous lesions and gastric adenocarcinoma were analyzed， and the correlation between the expression of PPARγ and PGC-1 and the pathological characteristics of gastric cancer were analyzed. Results The positive expression rates of PPARγ and PGC-1 in the gastric cancer tissues were lower than those in the precancerous lesion tissues and the normal gastric mucosa tissues， and the difference was statistically significant （P<0.05）. In 135 cases of gastric adenocarcinoma， the expression of PPARγ was positively correlated with PGC-1 expression （r=0.956， P<0.05）. The expression levels of PPARγ and PGC-1 were decreased with the lower ranked differentiation of gastric cancer （P<0.05）. The expression levels of PPARγ and PGC-1 were closely associated with the Borrmann type， Lauren classification， the histological differentiation and TNM tumor stage （P<0.05）. However， there was no significant association between the expression of PPARγ and PGC-1 and the gender， age and lymph node metastasis （P>0.05）. Conclusion The expression levels of PPAR and PGC-1 are closely related to the occurrence and development of gastric cancer. Monitoring the expression levels of PPARγ and PGC-1 may be helpful to predict the development and progression of gastric cancer. 　　[Key words] Gastric adenocarcinoma； Precancerous lesions； PPARγ； PGC-1
　　過氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptor gamma，PPARγ）是一类核转录因子[1]，有调节基因表达的作用，通过增加细胞凋亡从而实现对细胞增殖的抑制[2]。PPARγ辅助活化因子1（PGC-1）属于PPARγ的辅助活化因子家族，PGC-1通过与特异转录因子结合，对基因转录产生巨大效应。PGC-1对于线粒体功能、细胞能量代谢均有良好的调节作用，并通过这些作用的发挥参与到各种疾病的发生及发展当中[3-5]。近年来的研究指出，PPAR-γ及PGC-1分别在多种肿瘤发生、发展中起着重要作用，但具体的作用机制以及在临床诊断及治疗中的意义仍然不明了。以往研究显示PPARγ在食管癌、滤泡甲状腺癌、宫颈癌中表达下调[6-9]，在胰腺癌、卵巢癌中的表达明显上调[10-11]，而关于PPARγ及PGC-1在胃癌及癌前病变中表达情况的研究相对较少，进一步研究两者在胃癌前病变及胃癌组织中的表达，可明确PPARγ和PGC-1在胃癌演变各阶段过程中的表达水平，为胃癌早期诊断及进展提供依据。本研究对PPAR-γ、PGC-1在胃腺癌及癌前病变中的表达情况展开研究。
　　1资料与方法
　　1.1一般资料
　　本研究的组织标本为荆州市第二人民医院2011年1月～2016年9月收集的135例胃腺癌组织标本、52例正常胃黏膜组织标本以及19例慢性萎缩性胃炎、31例肠上皮化生、16例不典型增生等不同程度癌前病变组织标本。135例胃癌标本中，男87例，女48例；患者的年龄为35～84岁，平均（67.33±4.27）岁；Borrmann分型：Ⅰ型2例，Ⅱ型19例，Ⅲ型103例，Ⅳ型11例；Lauren分型：肠型胃癌63例，弥漫型胃癌60例，混合型胃癌12例；WHO组织学分型：乳头状腺癌1例，高分化管状腺癌1例，中分化管状腺癌53例，低分化腺癌62例，未分化腺癌3例，黏液腺癌13例，印戒细胞癌2例；淋巴结转移情况：41例未发生转移，94例发生转移。本研究通过了本院医学伦理委员会审核并遵循临床相关伦理研究规定，所有患者均知情并签署知情同意书。
　　1.2试剂
　　鼠抗人PPARγ单克隆抗体（批号：F16090-62，克隆号：3P25，上海抚生实业有限公司）、兔抗人PGC-1多克隆抗体（批号：100906B070，克隆号：G168-726，中杉金桥生物技术有限公司）、免疫组化试剂盒及DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术公司（工作浓度为1∶100）。
　　1.3方法
　　1.3.1免疫组织化学法检测组织中PPARγ、PGC-1表达 组织标本经10%甲醛固定后常规石蜡包埋，根据HE染色切片进行挑选蜡块，5 μm厚连续切片，免疫组化染色采用SP法，按试剂盒说明书进行操作。
　　1.3.2免疫组化结果判定 我院病理科主任使用奥林巴斯光学显微镜BX43观察病理标本（放大倍数为200倍）。PPARγ、PGC-1阳性表达为黄色颗粒，染色部位主要集中于细胞核和（或）细胞浆，以染色程度评分、阳性表达细胞百分比评分对PPARγ、PGC-1表达情况进行评估。染色程度评分：无着色为0分；有轻度着色，呈现浅黄色为1分；有中度着色，呈现棕黄色为2分；有重度着色，呈现棕褐色为3分。阳性细胞染色百分比评分：阳性细胞<5%为0分；阳性细胞在5%～25%之间为1分；阳性细胞>25%～50%为2分；阳性细胞>50%～70%为3分；阳性细胞>70%为4分。染色结果=染色程度评分×阳性表达细胞百分比评分，染色结果为0分，则为阴性（-），染色结果为1～4分为弱阳性（+），染色结果为5～8分为中度阳性（++），染色结果为9～12分为强阳性（+++）。
　　1.4统计学方法
　　采用SPSS 21.0统计学软件对相关数据资料进行处理分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，采用Spearman相关分析对胃癌中PPARγ、PGC-1表达相关性进行分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
　　2结果
　　2.1正常胃黏膜、癌前病变、胃腺癌组织中PPARγ的表达情况分析
　　PPARγ在胃腺癌组织、不典型增生组织、肠上皮化生组织、慢性萎缩性胃炎组织及正常胃黏膜组织中的表达总阳性率分别为54.07%（73/135）、87.50%（14/16）、83.87%（26/31）、89.47%（17/19）、71.15%（37/52）。各组织的PPARγ阳性表达情况为癌前病变>正常胃黏膜>胃腺癌，各组织间比较差异有统计学意义（P<0.05）（表1），具体表达情况见图1（封四）。
　　2.2正常胃黏膜、癌前病变、胃腺癌组织中PGC-1的表达情况分析
　　PGC-1在胃腺癌组织、不典型增生组织、肠上皮化生组织、慢性萎缩性胃炎组织及正常胃黏膜组织中表达总阳性率分别为48.15%（65/135）、62.50%（10/16）、87.10%（27/31）、89.47%（17/19）、69.23%（36/52）。各组织中的PGC-1阳性表达情况为癌前病变>正常胃黏膜>胃腺癌，差异有统计学意义（P<0.05）（表2），具体表达情况见图2（封四）。
　　2.3 PPARγ、PGC-1阳性表达与胃腺癌临床病理特征的关系
　　对135例胃癌患者的PPARγ、PGC-1阳性表达与病理关系进行分析，结果显示PPARγ、PGC-1阳性表达与患者的Borrmann分型、Lauren分型、组织分化程度及TNM分期有关（P<0.05）。PPARγ、PGC-1阳性表达与患者的性别、年龄、淋巴结转移无关（P>0.05）（表3）。 　　2.4胃腺癌中PPARγ、PGC-1表達相关性分析
　　本研究135例胃腺癌患者中，PPARγ、PGC-1均为阳性者62例，均为阴性者59例，PPARγ阴性、PGC-1阳性者3例，PPARγ阳性、PGC-1阴性者11例，两者之间的表达情况成正相关关系，r值绝对值为0.956，在0.8～1之间，接近于1（P<0.05），相关性强，具体见表4。
　　3讨论
　　胃癌为临床常见恶性肿瘤，发病率在我国各种肿瘤排名中居于第二位[12]。普遍观点认为胃癌是一个循序渐进的发展过程，即由正常→癌前病变→癌变的演变过程。PPAR-γ属于配体依赖核转录因子，有脂肪组织特异性，在各种代谢、肿瘤细胞的增殖分化及凋亡中都发挥重要作用[1-2]。PGC-1是PPAR-γ的主要转录刺激因子，直接影响其作用的发挥。在人食管癌中发现PPARγ表达下调[6]，然而在肺癌、结肠癌、乳腺癌中表达上调[13-15]。本研究结果显示，PPARγ、PGC-1在癌前病变组织中的表达水平明显高于正常胃黏膜组织（P<0.05），而在胃腺癌组织中的表达水平显著低于癌前病变组织、正常胃黏膜组织（P<0.05），提示PPARγ、PGC-1水平降低在胃黏膜细胞恶变的过程中可能是一个重要因素，在胃癌发生过程中可能发挥抑制作用。PGC-1在胃癌发展、形成阶段对于癌细胞的增殖、分化具有抑制作用，能够保护机体防止癌细胞侵害，分泌水平迅速提升以适应抑制癌细胞的需要，因此会出现癌前病变阶段PPARγ、PGC-1表达水平上调现象，而随着癌症的形成、恶化，癌细胞大量增殖、分化，PGC-1对癌细胞的抑制作用受限，无法正常发挥，进而出现表达下调现象。本研究结果提示PPARγ、PGC-1在癌前病变、癌症发展恶化中表达水平呈现“上升→下降”变化趋势，可能与其机体保护、癌抑制作用有关，但具体机制仍需要进一步研究证实。
　　本研究发现PPARγ、PGC-1阳性表达与患者的Borrmann分型、Lauren分型、WHO分型中管状腺癌的组织分化程度及TNM分期有关（P<0.05），但未发现与淋巴结转移有明显相关性。廖山婴等[16]的研究显示，PPARγ在胃癌低分化、淋巴结转移患者中的表达水平有明显提升，这与本研究有些许出入，可能与本研究选择的病例数相对较少有关，对于这一问题需进一步深入研究分析。本研究结果显示，PPARγ、PGC-1阳性表达率随着组织分化水平的降低而降低，提示Borrmann分型越高、Lauren分型越重、WHO分型中管状腺癌的分化度越低，患者的PPARγ、PGC-1表达度越低，PPARγ、PGC-1活性的逐步降低可能参与胃癌及进展，随着肿瘤恶化程度的加重，患者的PPARγ、PGC-1表达出现明显下调。但是PPARγ、PGC-1阳性表达与患者的性别、年龄、淋巴结转移与否无明显相关性（P>0.05），提示胃腺癌的PPARγ、PGC-1阳性表达状况与其病理分型密切相关。
　　PPARγ为潜在的肿瘤抑制因子，PGC-1为PPARγ的辅助活化因子，PGC-1改变能够影响PPARγ活动，进而在肿瘤疾病发生、发展中发挥作用[17-18]。本研究结果显示，PGC-1、PPARγ表达具有正相关关系，两者的相关性也支持两者在胃癌发生、发展中相互影响，共同发生作用。由于多重因素的影响和限制，本研究未能获得胃癌患者较准确的随访数据，以至于对胃癌的预后评估未能完成，从而未能得出PGC-1、PPARγ的表达与胃癌预后的相关性。
　　综上所述，本组研究证实胃癌癌前病变组织中PPARγ、PGC-1阳性表达上调，而胃癌组织中PPARγ、PGC-1阳性表达下调，且两者之间的变化具有同步性，提示PPARγ、PGC-1表达与胃癌发生、发展关系密切。PPARγ、PGC-1阳性表达与胃癌的Borrmann分型、Lauren分型、WHO分型中管状腺癌的组织分化程度有关，其表达水平会随着患者病情的恶化而降低，检测PPARγ、PGC-1表达水平，有助于预测胃癌的进展情况。
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　　（收稿日期：2018-09-19 本文编辑：祁海文）
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