胸腹水细胞块石蜡包埋联合免疫组织化学技术在病理学诊断中的应用价值

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　　【摘 要】目的：探讨细胞块石蜡包埋及免疫组织化学染色技术在胸腹水细胞病理诊断中的意义。方法：收集有异型细胞的浆膜腔积液71 例， 进行离心涂片、细胞块切片HE 染色， 并进行CK7、CK20、CDX-2、MOC-31、Calretinin、WT-1、B72.3、ER、PR、Ber-EP4、TTF-1、CA125 等免疫组织化学染色，进行选择性标记。结果：常规细胞涂片厚，背景不清晰;离心沉渣包埋切片细胞多而集中，背景清晰，染色鲜艳，并有一定的组织结构，免疫组织化学染色效果较好，阳性定位准确，可靠性高。结论：细胞块石蜡包埋及免疫组织化学染色技术，能提高胸腹水肿瘤细胞的检出率，对肿瘤的诊断、鉴别诊断及细胞来源有重要的价值。
　　【关键词】胸腹水;细胞块;石蜡包埋;免疫化学染色
　　【中图分类号】R730.4 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0019（2019）11-0-02
　　胸腹水是肿瘤性疾病的常见体征，胸腹水细胞学检查是临床最常用的方法，具有简便、快捷、痛苦小、创伤小等优点。通过观察细胞的大小、形态及结构变化，可进行定性诊断[1]。对临床送检的胸腹水， 国内大部分医院采用直接离心涂片法来做出诊断。但在实际应用中，我们发现直接涂片法存在涂片厚，细胞重叠，结构不清，细胞量少而阳性检出率低等缺点[2，3]，很难鉴别肿瘤细胞及增生的间皮细胞，并且不能判断瘤细胞的起源。胸腹水细胞块可以作为一种相对无创的标本收集方式，切片可以做到背景清晰、细胞结构完整、厚薄均匀，细胞块可以长久保存、反复切片，并且可以进行免疫组化染色，进一步确定肿瘤细胞的类型和来源，为临床诊疗提供客观依据[4、5]。
　　1 材料与方法
　　1.1 样本 收集我院临床科室送检的胸腹水共71例。其中胸水47 例，腹水24 例。男性33例，女性38例。年龄在45-81岁。临床明确有器官占位20例，胸腹水原因待查51例。
　　1.2 试剂 所有的免疫组化试剂、即用型试剂盒及DAB 显色剂均为美国DaKO试剂，使用DaKO全制动免疫组化仪进行实验步骤操作。
　　1.3 方法 （1）收集患者胸腹水，依据胸腹水的浓度取30-90ml 进行离心（2000r/min，5min）; （2）离心后弃去上清液，取少量沉淀做细胞涂片;（3） 在其余的沉淀中加入95%的乙醇至30ml，震荡2min 后离心（2000r/min，5min）;（4）离心后弃去上清液，加入10%福尔马林液体10ml固定;（5）静置2-3h，弃去福尔马林液体，将沉淀用纸包裹同其他组织块一起使用全制动脱水机进行常规处理。
　　2 结果
　　对71例疑为恶性胸腹水标本进行离心沉渣包埋及借助免疫组织化学染色，诊断结果：71例疑为恶性胸腹水中病变来源于肺癌为10例，来源于卵巢及输卵管的腺癌为6例，来源于消化道的腺癌为7例，来源于乳腺癌为1例，未明确原发灶的恶性肿瘤为4例，反应性间皮细胞增生为40例。细胞块切片常规HE 染色，切片中细胞丰富密集，染色分明，细胞结构清晰，具有一定的组织结构。免疫组织化学染色阳性信号定位准确，对比度好，背景干净。
　　讨论
　　胸腹水是临床上常见的一种体征，临床常需要在胸腹水中找脱落的癌细胞以确定有无肿瘤性病变及明确肿瘤性质[6]。常规细胞涂片所收集的细胞数量少，常有大量红细胞，炎性渗出物及黏液混在一起，造成背景不清晰、细胞多层重叠，给诊断造成非常大的困难。而胸腹水沉渣经福尔马林固定后，能像组织块一样进行脱水，包埋切片[7、8]。具备以下优点：操作简单，不需要过多的仪器。②可以收集所有的细胞，包埋在同一平面上，从而使碎小组织能完整切出，利于读片。③胸腹水制成的蜡块可以反复切片，便于会诊，长期保存[2]。④可以进行免疫细胞化学染色，对肿瘤的类型及来源进行准确的诊断与鉴别诊断。⑤通过分子标记物的标记，可以指导临床治疗方案的调整，对肿瘤的预后进行评估。⑥随着肿瘤个体化时代的到来，细胞块还可以进行分子检测，从而实施分子靶向治疗以及耐药基因的检测。
　　同时，用细胞块做免疫细胞化学染色，能做连续切片，可以多种抗体组合运用或对某一特定细胞的比较观察， 以满足诊断的需要及对其组织来源进行判别; 如Calretinin、WT-1阳性多提示为增生的间皮细胞， MOC-31、B72.3、Ber-EP4阳性多提示胸腹水中见转移癌，在此基础上，结合临床病史选择性做免疫组化，如CK7、TTF-1阳性多提示肿瘤细胞来源于肺，CK7、CA125 陽性多提示肿瘤细胞来源于卵巢，CDX2、CK20 阳性提示肿瘤细胞来源于胃肠道;但要说明的是，抗体的组织特异性并非绝对， 多种抗体联合进行免疫细胞化学染色并设立对照有助于克服某些抗体表达意义不明确造成的困惑。
　　参考文献
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