血清miR-372在鼻咽癌患者中的诊断和预后价值研究

来源:用户上传      作者:

　　[摘要]目的研究血清miR-372在鼻咽癌患者中的诊断和预后价值。方法选取116例鼻咽癌患者作为鼻咽癌组，另选同期58例健康志愿者作为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测两组研究对象血清中miR-372的表达水平，并进行比较;分析miR-372表达水平与患者临床病理特征之间的关系;建立受试者工作特征曲线（ROC）评估miR-372的诊断价值;通过Kaplan-Meier（KM）生存曲线和Cox回归分析评估miR-372的预后价值。结果qRT-PCR检测结果表明，血清miR-372在鼻咽癌组患者中的表达水平（2.130±0.786）显著低于健康对照组的（3.852±1.114），差异具有统计学意义（x2=11.794，P<0.01）。ROC曲线表明，曲线下面积（AUC）为0.888，说明miR-372具有较高的诊断鼻咽癌的能力;诊断截断值为3.135，灵敏度为87.1%，特异度为77.6%。Kaplan-Meier生存曲线表明，miR-372低表达与患者低生存率显著相关（log-rankP=0.012）。Cox回归分析证明miR-372是鼻咽癌患者的独立预后因子[HR=2.191，95%CI=（1.027，4.671），P=0.042<0.05]。结论鼻咽癌患者血清中miR-372的表达水平降低，是一个潜在的诊断和预后生物标志物，有望改善鼻咽癌患者的临床诊断和预后。
　　[关键词]miR-372;诊断;预后;鼻咽癌
　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.05.006
　　鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma）是一种发生于鼻咽黏膜上皮的恶性肿瘤，在中国的发病率较高，已成为困扰我国的一大健康难题[1]。目前对于鼻咽癌的研究证明，早期诊断对疾病的治疗具有重要意义，因此探寻有效的诊断方法有助于癌症患者的筛选。尽管人们已经研究出多种治疗肿瘤疾病的手段，但鼻咽癌患者总生存率以及预后情况并不理想。如何进一步改善鼻咽癌的诊断和预后，是治疗此疾病的研究重点之一。已有研究表明，微小RNAs（microRNAs，miRNAs）可以调控细胞多种生物学过程，其在肿瘤中的异常表达可能参与了肿瘤的发生和发展过程，具有较高诊断和预后的临床意义[2]，miR-372在结直肠癌、前列腺癌等多种癌症中均有相关报道[3，4]，但其表达水平在鼻咽癌中的临床意义尚不清楚。因此本研究旨在评估血清miR-372在鼻咽癌患者中的诊断及预后价值，为其在临床上应用作好基础性研究。现报告如下。
　　1资料与方法
　　1.1一般资料选取2010年3月～2013年2月寿光市第三人民医院收治的116例鼻咽癌患者作为鼻咽癌组，所有患者均经病理组织检查证实为鼻咽癌。其中男72例，女44例，平均年龄（66.1±8.9）岁。此外，本研究另选同期58例健康志愿者作为健康对照组，所有志愿者均无恶性肿瘤史。收集参试者血液样品，离心法获得血清样本，保持于-809C备用。本研究经本院医学伦理委员会批准，所有参与者均签署了知情同意书。癌症患者行肿瘤切除术后，均接受了为期5年的随访，对患者的生存情况及临床病理资料进行记录。
　　1.2方法总RNA提取和qRT-PCR使用TRIzol试剂（美国Invitrogen公司）提取血清样本中的总RNA，用反转录试剂盒Transeriptor First Strand eDNA Symthesis Kit（美国Qiagen公司），将RNA反转录为单链cDNA。采用SYBR green I Master Mix试剂盒（美国Invitrogen公司）在7300Real-TimePCR系统（美國Applied Biosystems公司）上，进行qRT-PCR反应。其中，U6作为反应内参基因使用，miR-372的最终相对表达量采用2-44C方法进行计算。
　　1.3统计学方法采用SPSS21.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验;计数资料以率（%）表示，采用x2检验;建立ROC曲线评估miR-372的诊断价值，用Kaplan-Meier方法和Cox回归分析
　　评估miR-372的预后价值。P<0.05表示差异具有统计学意义。2结果
　　2.1血清miR-372在鼻咽癌患者中的表达水平qRT-PCR检测结果表明，血清miR-372在鼻咽癌组患者中的表达水平（2.130±0.786）显著低于健康对照组的（3.852±1.114），差异具有统计学意义（x2=11.794，P<0.01）。见图1。
　　2.2miR-372表达量与患者临床病理特征之间的关系将患者以miR-372表达量均值为截断值，分为miR-372低表达组（66例）和miR-372高表达组（50例）。两组患者的淋巴结转移、分化程度以及TNM分期比较，差异具有统计学意义（P<0.05）;两组患者年龄、性别比较，差异无统计学意义.（P>0.05）。见表1。
　　2.3血清miR-372表达量在鼻咽癌患者中的诊断和预后价值ROC曲线表明，AUC为0.888，说明miR-372具有较高的诊断鼻咽癌的能力。诊断截断值为3.135，灵敏度为87.1%，特异度为77.6%。见图2A。Kaplan-Meier生存曲线表明，miR-372低表达与患者低生存率显著相关（log-rankP=0.012）。见图2B。Cox回归分析证明miR-372是鼻咽癌患者的独立预后因子[HR=2.191，95%CI=（1.027，4.671），P=0.042<0.05]。见表2。
　　3讨论
　　鼻咽癌是中国常见恶性肿瘤之一，多发于我国南方地区。研究发现，鼻咽癌病理类型以低分化或未分化肿瘤最为常见，恶性程度和侵袭性极高，发生远处转移的几率增加，且TNM晚期患者的5年生存率仅为30%[5]。随着医疗科技水平的不断发展，手术切除、放疗和化疗等先进治疗手段已经应用于鼻咽癌的治疗，但是多数患者初次诊断已经为鼻咽癌晚期，患者的生存率仍然得不到显著的改善[6]。因此，早期诊断和准确预后是目前改善鼻咽癌治疗的一大重要手段。 　　研究表明，miRNAs在人類各种疾病的病理进程中发挥了重要的调控作用。在鼻咽癌中，miR-3188[7]、miR-212[8]和miR-214[9]等异常表达水平的miRNAs，均被证明具有一定的临床意义，并可能参与了肿瘤进展。本研究收集了116例鼻咽癌患者的血清样本，通过qRT-PCR分析了样本中miR-372的表达水平，发现其在鼻咽癌患者中的表达水平较健康对照人群显著减少，说明miR-372在鼻咽癌肿瘤进展中可能扮演了抑癌miRNA的角色。此外，本研究发现miR-372表达水平与鼻咽癌患者的淋巴结转移、分化程度以及TNM分期具有显著的关系，说明miR-372可能参与了鼻咽癌的发展过程，miR-372低表达可能预测了鼻咽癌较高的恶性程度。
　　鉴于鼻咽癌患者血清miR-372的差异表达水平，本研究进一步分析了其在疾病诊断和预后中的应用价值。ROC曲线结果表明miR-372具有较高的诊断准确性，能够有效地从健康人群中区分鼻咽癌患者;Kaplan-Meier生存曲线分析结果提示，miR-372表达量低的鼻咽癌患者具有更短的总体生存时间，进一步的Cox回归分析证明了miR-372与患者预后独立相关，说明miR-372是鼻咽癌患者的独立预后标志物。除本研究中证明的miR-372在鼻咽癌中的临床意义，其在结直肠癌[3]、肝细胞癌[10]以及口腔癌[1]等恶性肿瘤的诊断和预后中均发挥了重要作用，说明miR-372在人类多种肿瘤疾病中具有重要的临床应用价值。
　　综上所述，血清miR-372在鼻咽癌患者中表达水平较健康对照人群显著减少，与肿瘤患者的淋巴结转移、分化程度和TNM分期具有显著的关系，miR-372的异常表达可能是鼻咽癌诊断和预后的潜在生物标志物。虽然本研究进一步丰富了miR-372在鼻咽癌中的临床意义，但是其在该疾病中的生物学功能及机制尚不清楚，需要更深入的分析和探究，以期为该疾病的治疗提供新思路。
　　参考文献
　　[1]Wei KR， Zheng RS， Zhang sW， et al. Nasopharyngeal carcinoma incidence and mortality in China， 2013. Chinese journal of cancer， 2017， 36（ 1）：90.
　　[2]Bertoli G， Cava c， Castiglioni I. MicroRNAs： New Biomarkers for Diagnosis， Prognosis， Therapy Prediction and Therapeutic Tools for Breast Cancer. Theranostics， 2015， 5（10）：1122-1143.
　　[3]Yu J， Jin L， Jiang L， et al. Serum miR-372 is a Diagnostic and Prognostic Biomarker in Patients with Early Colorectal Cancer. Anti-cancer agents in medicinal chemistry， 2016， 16（4）：424-431.
　　[4]Kong X， Qian X， Duan L， et al. microRNA-372 Suppresses Migration and Invasion by Targeting p65 in Human Prostate Cancer Cells. DNA and cell biology， 2016， 35（12）：828-835.
　　[5]Zhou Y， Shi D， MiaoJ， et al. PD-L1 predicts poor prognosis for nasopharyngeal carcinoma irrespective of PD-1 and EBV-DNA load. Scientific reports， 2017（7）：43627.
　　[6]Zhao Y， Shen L， Huang X， et al. High expression of Ki-67 acts  a poor prognosis indicator in locally advanced nasopharyngeal carcinoma. Biochemical and biophysical research communications， 2017， 494（1-2）：390-396.
　　[7]Zhao M， Luo R， Liu Y， et al. miR一3188 regulates nasopharyngeal carcinoma proliferation and chemosensitivity through a FOXO1一 modulated positive feedback loop with mTOR-p-PI3K/AKT-c-JUN.Nature communications， 2016（7）：11309.
　　[8]Jiang c， Wang H， Zhou L， et al. MicroRNA-212 inhibits the  metastasis of nasopharyngeal carcinoma by targeting SOX4. Oncology reports， 2017， 38（1）：82一88.
　　[9]Zhang ZC， Li YY， Wang HY， et al. Knockdown of miR-214  promotes apoptosis and inhibits cell proliferation in nasopharyngeal carcinoma. PloS one， 2014， 9（1）：e86149.
　　[10]WuG， Wang Y， Lu X， et al. Low mir-372 expression correlates with poor prognosis and tumor metastasis in hepatocellular carcinoma. BMC cancer， 2015（15）：182.
　　[11]Tu HF， Chang KW， Cheng HW， et al. Upregulation of miR-372 and-373 associates with lymph node metastasis and poor prognosis of oral carcinomas. The Laryngoscope， 2015， 125（11）：E365-E370.
　　[收稿日期：2019-11-13]
转载注明来源:https://www.xzbu.com/6/view-15175448.htm