Slit2蛋白在早期宫颈鳞癌中的表达及意义

来源:用户上传      作者:朱伟艳 刘田雨 刘永珠 张欣宁 姚书忠

　　 【摘要】 目的：探讨Slit2蛋白表达水平与早期宫颈鳞癌患者的临床病理特征及预后的关系。方法：选择2005年1月-2010年12月在中山大学附属第一医院经手术治疗的早期宫颈鳞癌患者共115例，正常宫颈上皮20例及高级别宫颈鳞状上皮内病变30例，采用免疫组化方法检测组织中Slit2的表达情况，分析其表达与宫颈癌预后的关系。结果：Slit2蛋白在正常宫颈、高级别宫颈鳞状上皮内病变宫颈组织及早期宫颈鳞癌组织中的阳性表达率呈逐渐下降趋势（P<0.001）。在早期宫颈鳞癌组织中，Slit2蛋白的表达与FIGO分期、肿瘤大小、浸润深度、淋巴脉管浸润及淋巴结转移均显著有关（P<0.05），而与年龄、组织分化程度无关（P>0.05）。Slit2阴性表达患者术后5年总生存率显著低于阳性表达患者，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Slit2的表达可能参与了宫颈癌的发生，与肿瘤临床病理特征和预后明显相关。
　　 【关键词】 Slit2 宫颈鳞癌 免疫组化 临床病理特征 5年总生存率
　　 Expression and Significance of Slit2 Protein in Early Cervical Squamous Cell Carcinoma/ZHU Weiyan， LIU Tianyu， LIU Yongzhu， ZHANG Xinning， YAO Shuzhong. //Medical Innovation of China， 2020， 17（01）： -135
　　 [Abstract] Objective： To investigate the relationship between the expression level of Slit2 protein and the clinicopathological features and prognosis of patients with early cervical squamous cell carcinoma. Method：From January 2005 to December 2010， 115 cases of early cervical squamous cell carcinoma， 20 cases of normal cervical epithelium and 30 cases of high-grade cervical squamous intraepithelial lesions were selected from the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University. The expression of Slit2 was detected by immunohistochemistry， the relationship between its expression and the prognosis of cervical cancer was analyzed. Result： Slit2 protein in normal cervix， expression of high-grade cervical squamous intraepithelial lesions and cervical cancer， cervix tissue was gradually decreased （P<0.001）. In early cervical squamous cell carcinoma， the expression of Slit2 protein was significantly correlated with FIGO stage， tumor size， depth of invasion， lymphatic vessel infiltration and lymph node metastasis （P<0.05）， but not related to age and tissue differentiation （P>0.05）. The 5-year overall survival rate of patients with negative expression of Slit2 was significantly lower than that of positive patients （P<0.05）. Conclusion： The expression of Slit2 may be involved in the occurrence of cervical cancer， which is significantly associated with the clinicopathological features and prognosis of the tumor.
　　 [Key words] Slit2 Cervical squamous cell carcinoma Immunohistochemistry Clinicopathological features 5-year overall survival
　　 First-author’s address： The Sixth Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University （Qingyuan People’s Hospital）， Qingyuan 511518， China
　　 doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.01.034
　　 宫颈癌是妇科最常见恶性腫瘤之一，目前是居于世界第三位的女性恶性肿瘤，已成为威胁女性健康和生命的严重疾病[1]。宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒感染相关[2-3]，但一些基因也参与了宫颈癌的发生发展[4]。Slit2是一种分泌性糖蛋白，在鼻咽癌、直肠癌、胃癌等消化道肿瘤及乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌等生殖系肿瘤中均有表达[5]。研究表明Slit2在多种恶性肿瘤中表达异常，并参与肿瘤的生长与转移[6-11]。许多学者发现Slit2在肿瘤中表达下降，发挥抑癌基因的作用[9]。基于此，该研究旨在分析Slit2蛋白表达水平与早期宫颈鳞癌患者的临床病理特征及临床预后的关系，以期为子宫颈癌的预防、治疗及预后判断提供新的靶点，现报道如下。 　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料 选择2005年1月-2010年12月在中山大学附属第一医院经手术治疗的早期宫颈鳞癌（ECSCC）患者共115例。（1）纳入标准：①局限于宫颈部位的宫颈癌，临床分期在ⅡA2期以内;②术前病理检查明确鳞状细胞癌;③标本切取前未接受放疗、化疗等治疗;④心肺等重要脏器功能可以耐受手术;⑤术后坚持接受随访。（2）排除标准：①术前曾接受放疗、化疗;②病理检查提示非鳞状细胞癌;③病历资料不完全，或不能配合随访;④肿瘤临床分期超过ⅡA2期;⑤心肺功能不全，或合并其他严重内科疾病不能耐受手术。另选择同期子宫肌瘤行全子宫切除术获得正常宫颈上皮（NCT）患者共20例，高级别宫颈鳞状上皮内病变（HSIL）行宫颈锥切术患者共30例。所有患者在患者和家属知情、自愿参与的情况下开展，病例纳入和随机分组方法均经本院医学伦理委员会批准。
　　1.2 方法 手术切除三组宫颈组织，制作免疫组化石蜡切片，运用免疫组化方法检测Slit2蛋白的表达情况。主要步骤：常规制作组织切片，厚度5 μm，二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化，抗原修复，加入3% H2O2溶液27 ℃孵育20 min，滴加正常山羊血清工作液，27 ℃孵育30 min;滴加鼠抗兔TSG-6单克隆抗体一抗（江苏碧云天科技有限公司，工作浓度1︰2000），置于湿盒内4 ℃孵育过夜，以正常小鼠IgG代替一抗作为阴性对照;滴加驴抗鼠IgG多克隆抗体二抗（江苏碧云天科技有限公司，工作浓度1︰500），置于湿盒中27 ℃孵育20 min;滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液（江苏碧云天科技有限公司），置于湿盒中27 ℃孵育20 min，PBS振荡洗涤5 min×3次;DAB显色、苏木素复染、盐酸酒精分化、氨水返蓝、梯度乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封片、室温晾干、光学显微镜下观察。
　　1.3 评价标准 采用双盲法，以细胞胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性表达，染色强度分4级：不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞百分比，即某类细胞5个视野（每400×高倍视野计数100个此类细胞）中阳性细胞所占比例的平均数，也可分为4级：0～5%，为0分;6%～25%，为1分;26%～50%，为2分;51%～75%，为3分;>75%，为4分。将上述两项指标（染色强度和阳性细胞百分比）分数相乘，按乘积结果评定免疫组化结果，即乘积0～2分为阴性，≥3分为阳性表达。
　　1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0统计软件包分析实验数据，计量资料采用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用率（%）表示，组间比较采用字2检验，均采用双侧检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 三组Slit2蛋白的表达情况比较 Slit2蛋白在NCT、HSIL及ECSCC组织中的阳性表达率呈逐渐下降趋势，差异有统计学意义（P<0.001）。并且NCT、HSIL、ECSCC三组中两两比较，差异均有统计学意义（P<0.005）。见表1。
　　2.2 Slit2蛋白阳性表达与早期宫颈鳞癌临床病理特征的关系 早期宫颈鳞癌组织中，Slit2蛋白的阳性表达与临床FIGO分期（P=0.019）、肿瘤大小（P=0.033）、浸润深度（P=0.003）、淋巴脉管浸润（P=0.022）及淋巴结转移（P=0.038）显著相关，而与年龄、组织分化程度无关（P>0.05）。见表2。
　　2.3 Slit2蛋白表达与早期宫颈鳞癌临床预后的关
　　系 根据免疫组化评分结果，将115例早期宫颈鳞癌分为Slit2高表达组和Slit2低表达组。其中Slit2高表达组32例，Slit2低表达组83例。运用Kaplan-Meire生存分析，Slit2低表达组患者的术后生存率较Slit2高表达组降低，比较差异有统计学意义（P<0.05）。见图3。
　　3 讨论
　　 宫颈癌的发生发展是一个多因素、多步骤的复杂过程，其癌变过程的分子基础包括抑癌基因的表达下降以及癌基因的异常过表达。DNA甲基化是抑癌基因失活的一个主要原因，它主要发生在启动子区的CpG岛。研究发现，宫颈癌中普遍存在抑癌基因启动子高甲基化的现象[12]。因此，研究抑癌基因甲基化有助于进一步揭示宫颈癌发生发展的机制。美国学者Narayan等运用定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）发现，在浸润性宫颈癌中Slit2在mRNA水平表达下降、其启动子甲基化水平升高，提示Slit2表達水平改变参与宫颈癌发生发展的过程[13]。
　　 文献[14]报道Slit2在血管形成过程中也发挥了重要作用，由于受体的不同，其在肿瘤血管生成中的作用也会发生改变，在肿瘤生长的早期Slit2主要起抑制肿瘤生长作用，而在肿瘤血管形成期，Slit2则通过对血管内皮细胞的趋化作用和促进血管生成的作用从而促进肿瘤的生长和转移[15]。
　　 Slit2无论是在肿瘤的凋亡、血管新生，还是侵袭转移方面，均发挥了重要作用，并且前期其他学者的研究已经发现在宫颈癌变过程中Slit2的表达发生改变[16]。本研究中，笔者发现SLIT2蛋白在正常宫颈上皮、高级别宫颈鳞状上皮内病变及早期宫颈鳞癌组织中阳性表达率呈逐渐下降趋势。同时Slit2蛋白的表达与宫颈癌临床FIGO分期、肿瘤大小、宫颈肌层浸润深度、淋巴脉管浸润及淋巴结转移相关，与年龄、组织分化程度无关。本研究与黄小莉等[17]报道Slit2蛋白与宫颈癌临床分期、宫颈癌浸润深度、淋巴结转移有关，与年龄、组织分化无关基本相符，但本研究提示Slit2蛋白表达与肿物大小有关，与黄小莉等[17]报道不一致。而且Slit2阴性表达患者术后5年总生存率较Slit2阳性表达患者明显降低，与国外报道结果相符[18-20]。此结果提示在早期宫颈癌中Slit2的表达下调可能增强了宫颈癌细胞的增殖能力，可能促进宫颈癌的恶性进展，可作为预测宫颈癌预后的指标之一，有可能成为早期宫颈癌新的诊治标志物或者治疗靶点。对宫颈癌病理组织结果Slit2蛋白阴性者临床应高度重视，制定个体化综合治疗方案，严密随访，适当增加随访次数，缩短随访间隔，以降低宫颈癌治疗后的复发和转移。 　　 综上所述，Slit2的表达可能参与了宫颈癌的发生，与肿瘤临床特征和预后明显相关;可作为预测宫颈癌生存预后的有效指标之一，有可能成为早期宫颈癌新的治疗靶点。
　　参考文献
　　[1] Jemal A，Bray F，Center M M，et al.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69-90.
　　[2]周晖，卢淮武，彭永排，等.《2015年NCCN宫颈癌临床实践指南》解读[J].中国实用妇科与产科杂志，2015，31（3）：185-191.
　　[3]陈春林.宫颈癌筛查在中国[J].中国实用妇科与产科杂志，2016，32（5）：393-394.
　　[4]张占薪，娄雪玲，姚丽.SREBP1在宫颈癌发生发展中的作用研究[J].中国实用妇科与产科杂志，2015，31（7）：660-663.
　　[5]李文华.Slit2/Robo1在人脑胶质瘤中的表在及临床意义[D].石家庄：河北医科大学，2015.
　　[6] Feng Y，Feng L，Yu D，et al.srGAP1 mediates the migration inhibition effect of Slit2-Robo1 in colorectal cancer[J].Journal of Experimental & Clinical Cancer Research Cr，2016，35（1）：191.
　　[7] Jiang L，Wang Y，Rong Y，et al.miR-1179 promotes cell invasion through SLIT2/ROBO1 axis in esophageal squamous cell carcinoma[J].Int J Clin Exp Pathol，2015，8（1）：319-327.
　　[8] Chen W F，Gao W D，Li Q L，et al.SLIT2 inhibits cell migration in colorectal cancer through the AKT-GSK3β signaling pathway[J].Int J Colorectal Dis，2013，28（7）：933-940.
　　[9] Sun G，Zhang C，Feng M，et al.Methylation analysis of p16，SLIT2，SCARA5， and Runx3 genes in hepatocellular carcinoma[J].Medicine （Baltimore），2017，96（41）：e8279.
　　[10] Bhattacharya R，Mukherjee N，Dasgupta H，et al.Frequent alterations of SLIT2-ROBO1-CDC42 signalling pathway in breast cancer：clinicopathological correlation[J].J Genet，2016，95（3）：551-563.
　　[11] Roperch J P，Grandchamp B，Desgrandchamps F，et al.
　　Promoter hypermethylation of HS3ST2， SEPTIN9 and SLIT2 combined with FGFR3 mutations as a sensitive/specific urinary assay for diagnosis and surveillance in patients with low or high-risk non-muscle-invasive bladdercancer[J].BMC Cancer，2016，16（7）：704.
　　[12]巫剑红.宫颈癌抑癌基因甲基化的研究进展[J].医学综述，2012，18（19）：3187-3190.
　　[13] Waterstrat A，Rector K，Geiger H，et al.Quantitative trait gene Slit2 positively regulates murine hematopoietic stem cell numbers[J].Sci Rep，2016，6：31412.
　　[14]吴婷，王伟章，耿建国，等.Slit/Robo信号在肿瘤发生发展中的作用[J].中国细胞生物学学报，2009，31（4）：486-490.
　　[15]赵丽，谷峰，马勇杰.Slit/Robo信号通路与恶性肿瘤发生发展和侵袭转移的关系[J].中华肿瘤杂志，2012，34（6）：405-408.
　　[16]袁立芹，胡元晶.定量檢测SLIT2基因甲基化对高级别宫颈癌前病变的诊断价值[J].天津医药，2016，44（12）：1500-1503.
　　[17]黄小莉，曲军英.Slit2/Robo1在宫颈癌中的表达及意义[J].中国临床药理学杂志，2015，31（6）：429-431.
　　[18] Singh R K，Indra D，Mitra S，et al.Deletions in chromosome 4 differentially associated with the development of cervical cancer： evidence of slit2 as a candidate tumor suppressor gene[J].Hum Genet，2007，122（1）：71-81.
　　[19] Mitra S，Mazumder-Indra D，Mondal R K，et al.Inactivation of SLIT2-ROBO1/2 pathway in premalignant lesions of uterine cervix： clinical and prognostic significances[J].PLoS One，2012，7（6）：e38342.
　　[20] Narayan G，Goparaju C，Arias-Pulido H，et al.Promoter hypermethylation-mediated inactivation of multiple Slit-Robo pathway genes in cervical cancer progression[J].Mol Cancer，2006，5：16.
　　（收稿日期：2019-06-20） （本文编辑：周亚杰）
转载注明来源:https://www.xzbu.com/6/view-15187508.htm