新疆塔额垦区羊源大肠杆菌抗菌药物敏感性调查
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摘要：对塔额垦区6个团场的15个羊养殖场（户）采样并分离大肠杆菌，用纸片擴散法进行抗菌药物敏感性检测。结果共分离76株大肠杆菌，临床药敏试验显示，67.1%的菌株对5～10种的抗菌药耐药，32.9%的菌株对10种以上的抗菌药物耐药，无完全耐药菌株，其中，164团分离株的耐药情况较严重，61.5%的菌株对10种以上的抗菌药物耐药，161、165、168与170的情况稍好。塔额垦区规模化养殖场中的羊源大肠杆菌对当前临床上允许使用的多种类型抗菌药物呈现一定程度的耐药，尤其是对临床中使用较多的青霉素、阿莫西林等耐药，这种耐药性的产生将对大肠杆菌病的抗菌药物治疗形成严重挑战，应选择性地使用抗菌药物，避免乱用、滥用抗菌药物，建议以流行菌株的耐药性为依据开展临床治疗。
关键词：羊规模养殖场;大肠杆菌;临床药敏试验
中图分类号：S859 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2019）12-0005-03
畜牧业一直是新疆塔额垦区经济发展的支柱产业之一，养羊业在畜牧业生产中始终处于重要不可替代的位置。大肠杆菌是肠道菌群的共生菌，可作为耐药基因贮藏库[1]。羊大肠杆菌病由致病性大肠杆菌（Escherichia coli）感染羊肠道或全身组织而引起，临床主要分为败血型和肠道型2种[2]。败血型主要表现全身症状，是由大肠杆菌侵入机体血液和组织液引起，体温升高可达42 ℃，以15日龄到2月龄间的羔羊发病最严重;肠道型以肠炎表现为主，主要发生于1周内的羔羊，病羊体温可升高到40～41 ℃，不及时治疗可在24 h内死亡，病死率达80%，给养羊业造成的经济损失较大[3]。抗菌药物是塔额垦区治疗该病的常用药物，主要有庆大霉素、安普霉素、恩诺沙星、氟苯尼考、多西环素、阿莫西林以及磺胺类药物等[4]。随着规模化水平提高和抗菌药物广范使用，对抗菌药物已呈现出越来越普遍的耐药性[5]，给临床治疗带来很大困难，了解塔额垦区各地养殖场羊大肠杆菌的耐药谱，筛选出高敏抗菌药物或组合进行治疗，能有效提高治疗效率，并延缓抗药性的快速蔓延。研究从多个团场的不同养殖场中随机采取样品，分离、鉴别出大肠杆菌，并参考抗菌药物敏感性试验执行标准及第23版资料增刊[6]，进行分离菌株的临床药敏试验，分析羊大肠杆菌的耐药现状，为基层临床兽医合理用药提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
2018—2019年，在新疆塔额垦区161、164、165、167、168、170团6个团场选取2～3个养殖场（户），肛子拭随机采集羊粪样。
1.2 方法
肛拭子接种于大肠杆菌特异性培养基，即伊红美蓝和麦康凯琼脂，37 ℃培养12～18h，观察菌落形态。大肠杆菌在麦康凯培养基上的菌落形态特征为桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润;在伊红美蓝培养基上形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。将纯化后的单个菌落接种于全自动微生物鉴定系统（VITEK 2 Compact System）进行生化鉴定，确定其菌种。
1.3 临床药敏试验
临床药敏试验使用纸片法，抗菌药物药敏纸片选取临床常用抗菌药物并参考“抗菌药物敏感性试验执行标准”中“美国临床微生物学实验室非苛养菌常规药敏试验和报告抗菌药物的建议分组”，共选取20种药物进行敏感性检测，分别为青霉素、阿莫西林、头孢唑啉（先锋Ⅴ）、头孢他啶（复达欣）、头孢拉定（先锋Ⅵ）、头孢哌酮（先锋必）、链霉素、庆大霉素、阿米卡星（丁胺卡那霉素）、麦迪霉素、阿奇霉素、强力霉素（多西环素）、氟苯尼考、多粘菌素B、诺氟沙星（氟哌酸）、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、克林霉素（氯洁霉素）。量取抑菌圈直径大小，反映分离病原对药物的敏感程度。药敏试验中使用的培养基、培养时间、试验操作、质控菌株等均按照抗菌药物敏感试验的执行标准进行[7]。
2 结果与分析
2.1 161团分离菌株临床药敏试验结果
161团15株大肠杆菌的抗菌药物临床药敏试验显示，所有的菌株对强力霉素、克林霉素耐药;90%以上的菌株对青霉素、麦迪霉素耐药;80%以上的菌株对阿莫西林、头孢拉定耐药;60%以上的菌株对链霉素、庆大霉素、氟苯尼考耐药;40%以上的菌株对阿米卡星、阿奇霉素、诺氟沙星耐药;对头孢唑啉、头孢他啶、头孢哌酮、多粘菌素B、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明表现敏感，耐药株不超过40%。试验结果见表1。
2.2 164团分离菌株的临床药敏试验结果
164团13株大肠杆菌的抗菌药物临床药敏试验显示，所有的菌株对青霉素、阿莫西林、麦迪霉素、强力霉素、克林霉素耐药;90%以上的菌株对氟苯尼考耐药;80%以上的菌株对头孢拉定耐药;60%以上的菌株对链霉素、庆大霉素、阿米卡星、阿奇霉素、诺氟沙星耐药;对头孢唑啉、头孢他啶、头孢哌酮、多粘菌素B、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明表现敏感，耐药株均不超过40%。试验结果见表2。
2.3 165、167、168团分离菌株临床药敏试验结果
165、167、168团36株大肠杆菌的抗菌药物临床药敏试验显示，所有的菌株对克林霉素耐药;90%以上的菌株对青霉素、麦迪霉素、强力霉素耐药;80%以上的菌株对阿莫西林、头孢拉定耐药;60%以上的菌株对链霉素、庆大霉素、氟苯尼考耐药;40%以上的菌株对阿米卡星、阿奇霉素、诺氟沙星耐药;对头孢唑啉、头孢他啶、头孢哌酮、多粘菌素B、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明表现敏感，耐药株均不超过40%。试验结果见表3。 2.4 170团分离菌株临床药敏试验结果
170团12株大肠杆菌的抗菌药物临床药敏试验显示，所有的菌株对青霉素、阿莫西林、麦迪霉素、强力霉素、克林霉素耐药;80%以上的菌株对头孢拉定敏感;60%以上的菌株对庆大霉素、氟苯尼考耐药;40%以上的菌株对链霉素、阿米卡星、阿奇霉素、诺氟沙星耐药;对头孢唑啉、头孢他啶、头孢哌酮、多粘菌素B、环丙沙星、恩诺沙星、复方新诺明表现敏感，耐药株均不超过40%。试验结果见表4。
2.5 塔额垦区6个团场羊大肠杆菌的临床耐药现状
对塔额垦区羊大肠杆菌的临床药敏试验数据分析发现，6个团场分离株的多重耐药情况均比较严重，67.1%的菌株对5～10种的抗菌药物耐药，32.9%的菌株對10种以上的抗菌药物耐药，无完全耐药菌株，其中，164团分离株的耐药情况较严重，61.5%的菌株对10种以上的抗菌药物耐药，161、165、168和170的情况稍好。具体耐药现状见表5。
3 讨论
大肠杆菌病是影响塔额垦区养羊业发展的高发疾病，该区2015年以来大力发展养羊业，规模化和标准化水平不断提高，各类抗菌药物在兽医临床中广泛应用，在抗菌药物的选择压力和菌株适应性变异的双重作用下，造成耐药菌株的出现，给临床治疗带来较大困难。对塔额垦区6个团场的76株大肠杆菌的临床药敏试验发现，80%以上的菌株对青霉素、阿莫西林、头孢拉定、麦迪霉素、强力霉素、克林霉素耐药，对氟苯尼考的耐药菌株也达到了73%，链霉素、庆大霉素、阿米卡星、诺氟沙星的耐药菌株为60%左右。其中，164团的分离株耐药情况较严重，除青霉素、阿莫西林外，对头孢拉定、链霉素、庆大霉素、麦迪霉素、强力霉素、氟苯尼考、阿米卡星等9种抗菌药物均显示出较高耐药率，耐药性≥10种抗菌药物菌株数占检测菌株数的61.5%。另外，头孢唑啉、头孢他啶、头孢哌酮、多粘菌素B、环丙沙星、复方新诺明6种药的敏感菌株均为80%以上，阿奇霉素、诺氟沙星、恩诺沙星、左氧氟沙星4种药物也表现敏感。根据上述调查结果，为防止或延缓多重耐药的产生蔓延，提高治愈率，，建议塔额垦区羊养殖场（户）和养殖小区要定期进行致病菌的药物敏感性评价，指导临床兽医合理搭配使用抗菌药物。
4 结论
新疆塔额垦区大肠杆菌临床抗菌药物敏感性调查显示，羊源大肠杆菌的耐药情况比较严重，多个团场的试验菌株均存在不同程度的耐药性，且已经呈现出多重耐药的特征，即有25株（32.9%）大肠杆菌对≥10种抗菌药物表现出耐药，这类菌株的存在和蔓延将对塔额垦区大肠杆菌病的治疗和养羊业的发展构成威胁。有51株（67.1%）大肠杆菌对≤10种抗菌药物表现出耐药，大部分菌株对头孢唑啉、头孢他啶、头孢哌酮、阿奇霉素、多粘菌素B、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明表现敏感，建议在临床治疗选择抗菌药物时，以流行菌株的耐药性为依据。
参考文献：
[1] 夏利宁，向 发，罗小鱼，等.新疆某羊场分离的大肠杆菌对抗生素耐药性调查[J].新疆农业科学，2014，51（1）：150-156.
[2] 张学海，马铁柱.规模化养羊场羔羊大肠杆菌病的治疗[J].中国动物保健，2018，20（9）：27-28.
[3] 刘正明，李金泉，黄德浩，等.内蒙古地区羊源大肠杆菌耐药性研究[J].中国畜牧兽医，2017，44（3）：839-846.
[4] 伍祥龙.羔羊大肠杆菌病的诊治[J].畜禽业，2019，30（5）：71.
[5] 刘爱辉，韩红霞，赵朝山.羊源大肠杆菌Vero毒素基因及耐药表型与耐药基因分析[J].养殖与饲料，2017（5）：76-77.
[6] PHILIP M S，KATE K M.Diagnosis of mastiffs for therapy decisions[J].Vet Clin Food Anita，2013，19（1）：93-108.
[7] CLSI.Document M02-A11.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[M].Wayne：Clinical and laboratory standards institute，2013.
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