辅料姜汁对黄连生物碱成分的影响

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　　 摘要：目的  考察采用辅料姜汁炮制前后黄连生物碱成分的变化。方法  建立HPLC同时测定格兰地新、盐酸药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱7种成分含量的方法，并对辅料姜汁炮制前后黄连中生物碱成分含量进行测定和分析。结果  方法学考察表明，测定方法准确度高、重复性好。经姜汁炮制后，黄连中格兰地新、盐酸药根碱和盐酸巴马汀含量显著提高（P<0.05），7种生物碱总含量有所提高。结论  黄连经辅料姜汁炮制后，部分生物碱成分含量发生变化。
　　關键词：黄连;辅料;姜汁;生物碱;炮制
　　中图分类号：R283.2    文献标识码：A    文章编号：1005-5304（2019）05-0069-04
　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.05.015 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
　　Abstract： Objective To investigate the changes of alkaloids in Coptidis Rhizoma before and after processing with adjuvant ginger juice. Methods The HPLC method for determining the contents of granitin， jatrorrhizine hydrochloride， columbamine， epiberberine， coptisine hydrochloride， palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride simultaneously was established. The contents of alkaloids from Coptidis Rhizoma were measured and analyzed before and after processing. Results The methodological study showed that the HPLC method was accurate and reproducible. The contents of granitin， jatrorrhizine hydrochloride and palmatine hydrochloride in Coptidis Rhizoma significantly increased by ginger juice processing （P<0.05）. The total contents of seven alkaloids increased. Conclusion The contents of some alkaloids in Coptidis Rhizoma change after adjuvant ginger juice processing.
　　Keywords： Coptidis Rhizoma; adjuvant; ginger juice; alkaloids; processing
　　姜汁是中药炮制常用辅料之一。与其他炮制用辅料相比，姜汁具有许多代表性的特点[1-3]：一是药辅合一，生姜本身就是一味中药，既可直接入药，又可制备成姜汁后作为炮制用辅料使用;二是药食同源，除药用外，生姜也是生活中常用的调味料和食品;三是临用现制，姜汁不易保存，一般为使用前制备。黄连最早记载于《神农本草经》，其来源为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta Wall.的干燥根茎，其味苦性寒，归心、脾、胃、胆、大肠经[4]。黄连为“痢家圣药”，具有泻火解毒、清热燥湿功效，常用于治疗湿热所致的腹泻、痢疾、热盛火炽、呕吐、口舌生疮等[5]。但生黄连苦寒之性较甚，过服或久服易伤脾胃，故临床常根据需要选用其不同炮制品，其中，姜黄连是至今临床使用较多的炮制品[6-8]。黄连经姜汁炮制后，其活性成分和功效均会发生变化。本试验通过对姜汁炮制前后黄连生物碱类化学成分的变化进行研究，进一步了解炮制用辅料姜汁对黄连的影响，进而为阐明辅料姜汁对黄连的炮制机理提供基础。
　　1  仪器与试药
　　LC-20AT高效液相色谱仪（配有SPD-M20A PDA检测器），日本岛津公司;XP105型电子天平，瑞士梅特勒-托利多公司;KQ-800DE数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司;FW13高速粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司。
　　对照品格兰地新、盐酸药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱（纯度≥98.0%，批号分别为170823-025、170822-069、161121-009、170711-109、170426-003、170822-031、170105-028），成都德思特生物技术有限公司;乙腈、甲醇为色谱级，美国Fisher公司;甲酸，色谱级，北京迪马科技有限公司;盐酸、氨水、乙酸铵，北京化工厂;十二烷基硫酸钠，国药集团化学试剂有限公司。生姜，产地四川犍为，购于四川夹江县市场，经中国中医科学院冯学峰教授鉴定为姜科植物姜Zingiber officinale Rose.的新鲜根茎;黄连（产地四川），安国市昌达中药材饮片有限公司提供，经中国中医科学院冯学峰教授鉴定为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.的干燥根茎。
　　姜黄连为自制，参考《中华人民共和国药典》黄连饮片项下方法[4]。炮制时，将生姜洗净，捣烂，加水适量，压榨取汁，姜渣再加水适量，重复压榨1次，合并汁液，即得姜汁。姜汁与生姜比例为1∶1（V∶W）。取待炮制黄连适量，加12.5%姜汁拌匀，闷润1 h，置不锈钢锅内，用文火炒至姜汁被吸尽，取出，晾干，即得姜黄连[8];同法加入12.5%纯净水炮制，即为水黄连。取干燥的黄连、姜黄连和水黄连，打粉后过2号筛，于干燥器内贮存备用。 　　2  方法
　　2.1  供试品溶液的制备
　　称取黄连、姜黄连和水黄连样品各0.1 g，分别置于100 mL具塞锥形瓶中，加入50 mL甲醇-盐酸（100∶1）溶液，分别称定质量，超声（功率1800 W，频率40 kHz）30 min，静置，放冷至室温，再次称重，以甲醇-盐酸（100∶1）溶液补齐减失的质量，0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
　　2.2  对照品溶液的制备
　　分别称取对照品格兰地新、盐酸黄连碱、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、盐酸小檗碱0.19、1.96、0.56、1.15、1.99、0.47、7.69 mg置同一10 mL量瓶中，用甲醇-盐酸（100∶1）溶液溶解，定容至刻度，混匀，即得格兰地新、盐酸黄连碱、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、盐酸小檗碱的混合对照品贮备液。取混合对照品贮备液1 mL，转移入2 mL量瓶中，加入甲醇-盐酸（100∶1）溶液至刻度，作为混合对照品溶液。
　　2.3  色谱条件
　　色谱柱为安捷伦Zorbax Extend-C18（4.6 mm×
　　250 mm，5 μm），流动相为乙腈∶混合溶液（0.25 mol/L醋酸铵和8 mmol/L十二烷基硫酸钠，临用前调整pH值为9.3）=36∶64，流速1.0 mL/min，进样量10 μL，柱温35 ℃，检测波长270 nm。在该色谱条件下，7种生物碱峰形良好，各峰分离度、拖尾因子均符合要求。色谱图见图1。
　　2.4  方法学考察
　　2.4.1  线性关系考察
　　取“2.2”项下混合对照品溶液，0.22 ?m滤膜过滤后，按上述色谱条件进样4、6、8、10、12、14、16、18、20 ?L。以进样量（?g）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，计算得到格兰地新、盐酸黄连碱、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、盐酸小檗碱的标准曲线及线性范围。结果表明，7种生物碱在相应浓度范围内线性关系良好，见表1。
　　2.4.2  精密度试验
　　精密取混合对照品溶液10 ?L，重复进样6次，按上述色谱条件测定，测定峰面积，并计算峰面积RSD。结果格兰地新、盐酸药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀及小檗碱的峰面积RSD分别为0.4%、0.4%、0.5%、0.4%、0.3%、0.4%、0.4%，表明精密度良好。
　　2.4.3  稳定性试验
　　取同一批供试品溶液，分别于0、4、8、12、16、20、24 h按上述色谱条件注入液相色谱仪，进样量为20 ?L，测定峰面积，并计算峰面积RSD。结果24 h内，供试品溶液中格兰地新、盐酸药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀及小檗碱的峰面积RSD分别为3.8%、1.1%、0.9%、0.5%、0.7%、0.1%、0.3%，表明供试品溶液在室温条件下放置24 h保持稳定。
　　2.4.4  重复性试验
　　分别取6份同批姜黄连粉，每份0.1 g，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，进样20 ?L，记录峰面积，并计算峰面积RSD。结果格兰地新、药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀及小檗碱的峰面积RSD分别为0.6%、0.3%、0.2%、0.2%、0.1%、0.9%、0.3%，表明本方法重复性良好。
　　2.4.5  加样回收率试验
　　取已知含量的姜黄连样品6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按所称取样品中各成分含量加入混合对照品溶液，按上述色谱条件测定，用外标法计算加样回收率，结果7种生物碱成分平均加样回收率介于98.0%～101.0%，RSD均小于2.0%，见表2。表明本方法准确度良好。
　　2.5  样品含量测定
　　取黄连、水黄连和姜黄连样品，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样分析，用外标法计算样品中7种生物碱成分的含量，结果见表3，样品色谱图见图2。经姜汁炮制后，黃连中的格兰地新、盐酸药根碱和盐酸巴马汀含量显著提高（P<0.05），而水黄连中非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱和盐酸小檗碱含量显著降低（P<0.05），其他生物碱含量未见明显变化。有研究表明，用醋处理可以提高某些生物碱的溶解度，而其机制是水溶性盐的形成[9]。本试验所用姜汁pH值约为6.5，弱酸性条件可能是影响姜黄连中格兰地新、盐酸药根碱和盐酸巴马汀含量的因素之一。
　　3  讨论
　　生物碱是黄连的主要活性成分，在炮制过程中，其生物碱含量也会发生一定变化。本研究建立了HPLC同时测定黄连中7种生物碱成分含量的方法，方法准确度高、重复性好，并应用于黄连、姜黄连和水黄连的生物碱成分含量测定，可为黄连炮制品质量控制标准的建立提供参考。
　　中药药性包括中药的四气、五味、升降浮沉、归经及毒性，其中四气又称四性，指的是寒、热、温、凉。黄连是典型的寒凉性中药，当选用不同种类的辅料炮制后，其寒凉之性会发生变化。因此，临床使用黄连时根据具体病性、病位的不同及患者体质的差异，辨证使用不同的炮制品。生姜辛温，传统炮制理论认为姜制黄连以热制寒，缓和黄连苦寒之性。生姜具有引经作用，能引药入脾经，具有温、散的药性和药效，可降低或缓解中药的毒副作用。本试验从黄连中生物碱成分角度研究辅料姜汁对黄连的影响，结果显示，黄连经姜汁炮制后，7种生物碱的总含量有所提高，而经水炮制后有所降低。生物碱总含量为姜黄连>黄连>水黄连。
　　本研究仅针对黄连生物碱的含量变化，其他成分如阿魏酸、绿原酸等有机酸、微量元素等成分[10]的变化有待进一步研究。另外，在药理研究方面，姜汁对黄连的抗菌作用和对胃肠机能作用的影响已有报道[11]，但在姜汁炮制作用机理方面有待进一步研究。 　　参考文献：
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　　（收稿日期：2018-08-18）
　　（修回日期：2018-09-06;编辑：陈静）
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