黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展

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　　摘要：在综述国内黄芪中黄芪甲苷含量测定方法基础上，分析黄芪中的黄芪甲苷含量测定方法研究进展，包括HPLC-ELSD法、HPLC/ESI-MS联用法、HPLC-UV法、UPLC-MS法、HPLC-DAD-ELSD法等，旨在为进一步开展黄芪相关研究提供理论借鉴。
　　关键词：黄芪甲苷;含量測定;黄芪;HPLC-ELSD;HPLC/ESI-MS
　　中图分类号：R284.2    文献标识码：A    文章编号：1674-1161（2019）04-0049-03
　　 黄芪具有补气升阳、益卫固表、利水消肿和托疮生肌等功效。目前，主要用黄芪皂苷中的黄芪甲苷（astraga bside IV）作为评价黄芪药材质量的标准。在查阅收集大量文献的基础上，综述黄芪甲苷的检测方法研究进展，为黄芪甲苷相关研究提供技术借鉴。
　　1 黄芪中黄芪甲苷含量测定方法
　　 黄芪甲苷的检测方法主要有HPLC-ELSD法、HPLC/ESI-MS联用法、HPLC-UV法、UPLC-MS法、HPLC-DAD-ELSD法、近红外光谱法等。
　　1.1 HPLC-ELSD法
　　蒸发光散射检测器作为通用型检测器，不依赖于化合物光学性质，对非挥发组分均有较好的响应，广泛应用于皂苷类、萜类、生物碱类、糖类等中药成分的质量控制。
　　崔雪莹等探讨蒸发光散射检测器高效液相色谱法（HPLC-ELSD）测定黄芪中4种皂苷类活性成分含量的可行性。采用ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以水-乙腈为流动相梯度洗脱，流速0.8 mL/min，载气流速1.2 L/min，漂移管温度105 ℃。测定结果表明，黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ的含量分别为4.40 ，0.2，1.42，1.31 mg/g，分别在0.476～5.712，0.139～8.340，0.434～6.944，0.392～4.704 μg范围内呈线性关系，精密度分别为2.25%，0.81%，2.52%，2.31%，平均回收率分别为101.84%，98.96%，103.27%，100.35%。
　　 林宏琳等通过HPLC-SPD-ELSD串联系统比较、样品前处理及色谱条件优化，测定保健食品中黄芪甲苷的量。以甲醇为提取溶剂对样品进行超声提取，色谱柱选用Thermo Accucore XL C8（150 mm×4.6 mm，4 μm），流动相为乙腈-水（32∶68），柱温35 ℃，体积流量1 mL/min，紫外检测波长192 nm，进样量20 μl，漂移管温度40 ℃，氮气压力308 kPa。测定结果表明：黄芪甲苷在0.05～0.25 mg/ml范围呈良好线性关系，ELSD和SPD分别为0.999 8和0.999 2;方法检出限为0.02，0.04 mg/g;3批样品黄芪甲苷平均含量分别为1.06，1.03，1.05 mg/g和1.11，1.06，1.09 mg/g，平均加样回收率为96.80%，98.70%。该法便捷经济、准确可靠，可根据实际情况选择ELSD或SPD检测器，为保健食品中黄芪甲苷的质量控制与评价及相关研究提供适用方法。
　　1.2 HPLC/ESI-MS联用法
　　 电喷雾质谱（ESI-MS）是一种可得到每个色谱峰的紫外光谱图、保留时间、相对分子质量和特征碎片等信息的软电离质谱技术，与质谱联用可弥补常规紫外检测对某些紫外吸收弱的化合物不灵敏、提供分子结构信息较少的缺点。
　　 张文敬等利用高效液相色谱法制备黄芪水煎液中的黄芪甲苷，并通过质谱对收集到的组分进行鉴定。分析型色谱条件为：色谱柱EcliPseXDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）柱，乙腈-水梯度洗脱，柱温25 ℃，流速0.8 mL/min，检测波长254 nm，进样量20 μL。制备型色谱条件为：Hypersil C18（20 mm×300 mm，10 μm）柱，流速10 mL/min，进样量2 mL，其他同分析型色谱。质谱分析法为电喷雾离子化（electrospray ionization，ESI）源，电压3.5 kV，正、负离子检测，鞘气（N2）流速80 a.u.，辅助气（N2）流速15 a.u.，碰撞气体为氦气，毛细管温度350 ℃，毛细管电压±5 V。全离子扫描范围50～2 000 m/z。经分析型色谱得标准曲线回归方程为：A=0.1717 C+0.4657，r=0.999 6，在0.01～0.2 mg/mL范围内线性关系良好。制备型色谱方法得到的峰型较好，峰间隔适当，能够将相邻组分分离。收集保留时间为26 min的组分，经分析型色谱和ESI-MSn鉴定为黄芪皂甙IV（astragaloside IV），即黄芪甲苷，且纯度可达95%。
　　1.3 HPLC-UV法
　　 高效液相色谱法是检测药材中成分含量的一种常用方法。紫外检测器灵敏度高，噪间低，线性范围宽，选择性好，对环境温度、流动相组成变化和流速波动不敏感，可用于等浓度洗脱，也可用于梯度洗脱。
　　 姜丽丽等建立黄芪干根中HPLC-UV法测定黄芪甲苷的方法，比较蒙古黄芪、野生黄芪和膜荚黄芪3种不同来源样本的黄芪甲苷含量。采用HPLC-UV法，色谱柱为Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm），流动相为乙腈∶水（32∶68），流速1.0 ml/min，检测波长203 nm。黄芪甲苷在0.05～0.50 mg/ml范围内线性关系良好（r=0.999），平均回收率为98.216%（RSD=2.85%）;黄芪甲苷含量为野生黄芪>膜荚黄芪≈蒙古黄芪。
　　1.4 UPLC-MS法
　　 用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS法）测定物质含量，具有准确、快速、高效、灵敏等优点，可用于黄芪中黄芪甲苷的快速测定，提高分析效率。
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