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紫草油提取工艺的研究

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  摘要:目的:优选麻油提取紫草素的最佳提取工艺。方法:以左旋紫草素含量为指标,应用正交实验设计,筛选紫草油的最佳提取工艺。结果:取紫草加6倍麻油量、提取温度60℃、提取时间2h,可制备最佳紫草素。
  关键词:紫草素;提取工艺;正交试验
  中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2008)04-0861-02
  
  紫草为紫草科植物新疆紫草Arnebia euchroma(Royle)johnst.或内蒙紫草drnebia guttata Bunge.的干燥根。史载于《神农本草经》,味苦、性寒、具有凉血解毒透疹之功效。用于血热毒盛、斑疹、麻疹不透、疮疹湿疹、水火烫伤[1]。紫草中的主要成分为萘醌类色素,主要有乙酰紫草素、紫草素等[3]。紫草素具抗炎[4]、促进肉芽组织生成[5]等药理作用。传统工艺多采用高温油炸或冷浸过夜等方法来制备紫草油。本实验采用正交试验法,以左旋紫草素为指标,对提取油量、提取温度和提取方法3个因素进行考察,以期能优选出麻油提取紫草素的最佳工艺。
  
  1仪器与试药
  
  1.1仪器
  TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);双列4孔电热恒温水浴锅(山东医疗器械厂);KDM型调温电热套(山东省鄄城光明仪器有限公司);DHE-600型多功能红外快速干燥箱(杭州蓝天化验仪器厂);普利赛斯XS系列原装天平。
  
  1.2试药
  紫草原药材(济南药业集团有限责任公司中药饮片厂,批号20070305);左旋紫草素对照品(中国药品生物制品检定所,1l01769―2004050:麻油(济南药业集团)。
  
  2实验方法
  
  2.1正交实验设计
  通过考察,确定紫草的提取油量、提取温度、提取时间3个因素,设计采用3因素3水平,选用L9(34)正交试验进行实验,因素水平见表1。
  
  
  2.2样品中紫草素提取量测定
  2.2.1样品溶液制备称取紫草药材10g粉碎,加入适量麻油浸渍24h,按L9(34)正交表安排提取滤过,收集合并麻油提取液至100mL容量瓶中,加麻油至刻度,得供试品溶液A1~A9,待测。
  2.2.2标准曲线的绘制精密称取左旋紫草素标准品4.7mg置25mL容量瓶中,加麻油溶解并稀释至刻度,得浓度约为0.188mg/mL的左旋紫草素对照品溶液,作为标准品储备液(Ⅰ)。再分别精密吸取Ⅰ液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL,分别加麻油定容于10mL容量瓶中,按分光光度法,以麻油作空白对照,在516nm处测定吸收度。用最小二乘法,以吸收度值(A)为纵坐标,以对照品浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线,求得回归方程为:A=0.0215C+0.0435 r=0.9990,说明左旋紫草素浓度在7.52~45.12μg/mL的范围内有良好的线性关系。
  2.2.3精密度实验精密量取样品A8 0.5mL置10mL容量瓶中,用麻油稀释至刻度,再精密吸取稀释液2.0mL加麻油定容至10mL。以麻油为空白,在516nm下用紫外分光光度计连续测定6次,RSD为0.625%,表明精密度良好。
  2.2.4稳定性试验日内稳定性:取样品A8,按照精密度试验项下测定方法,每小时测1次,连续测定6h,RSD为0.470%,表明样品稳定性良好。
  2.2.5加样回收率试验精密量取样品A8 2.0mL 5份,分别加入标准品储备液(Ⅰ)0.4、0.4、0.4、0.6和0.6mL:得供试品溶液B1~B5。以麻油作空白,在516nm波长下测定吸收度,测得平均回收率为101.2%,RSD为0.6067%。
  2.2.6供试品含量测取得批次样品,按照精密度项下测定方法操作,得供试品溶液C1~C9。按分光光度法,以麻油作空白,在516nm处测定吸光度,结果见表2。
  
  
  3实验结果
  
  紫草素提取量的正交试验结果:从表3可知,极差(R)最大的为A因素,其次分别为C因素B因素,说明在麻油提取紫草素工艺中,对提取量影响最大的因素为提取油量,其次分别为提取时间、提取温度。
  方差分析结果:从表4可知,A因素3个水平之间有显著性差异(P<0.05),A因素选择水平3。C因素、B因素3个水平之间差异无显著性意义(P>0.1)。确定最佳提取工艺为A2、B1、C2。即最佳提取油量为6倍量,提取温度为60℃,提取时间为2h。
  
  
  4验证实验
  
  取10g粉碎的紫草加6倍量麻油浸渍24h,在最佳提取条件下提取,按照样品含量测定项下方法,在516nm处测定吸收度。重复实验3次,取平均值,结果见表5。
  
  
  5讨论
  
  正交设计法对紫草油的提取工艺条件研究表明,影响紫草油提取率的因素依次为:提取油量>提取时间>提取温度。最佳工艺条件为:提取油量为6倍,提取时间为2h,提取温度为60℃。
  按照确定的工艺条件,进行验证实验。结果表明,测定结果几乎等于或优于相应的正交表中的任何一组。
  紫草主含紫草素,紫草素不溶于水,可溶于醇、有机溶剂和植物油。麻油与紫草素结构相似,作为提取溶剂,不仅可以得到较高的溶出量,也是良好的成型基质,具有润泽肌肤抗氧化等作用[6]。
  曾有文献报道[7],用苯、90%乙醇回流和麻油3种溶剂提取紫草油,乙醇回流提取方法得到的含量最高。考虑到对皮肤溃疡患者慎用乙醇的用药特殊性[8]及苯的毒性等因素,麻油应为最佳提取溶剂。
  紫草中主要有效成分为乙酰紫草醌、紫草醌、紫草烷等脂溶性成分。有试验证明紫草中萘醌类色素成分具有对热不稳定性。紫草素在加热60℃以上颜色中华中医药学刊由红色变成紫黑色,随温度升高变化速度加快,薄层色谱法检查斑点消失提示紫草素被破坏[9]。传统工艺采取的大火煎炸,容易使紫草素发生变异。本实验采用正交设计法确定最佳提取温度为60℃,不仅危险性小、利于操作、回收率也较高。
  
  参考文献
  [1]王珠劳,祝丽琴,高志军,等.复方紫草油治疗烧烫伤305例[J].新中医,2001,33(12):53.
  [2]葛锋,王晓东,王玉春.药用紫草得研究进展[J].中草药,34(9):附6-附9.
  [3]严松柏,谈献和,胡玉涛.紫草得研究进展[J].时珍国医国药,2003,14(2).
  [4]王文杰,白金叶,刘大培,等,紫草素抗炎及对白三烯β-生物合成得抑制作用[J].药学学报,1994,29(3):16.
  [5]吴皓.右旋紫草素和紫草素促进大鼠肉芽组织增生得组织学研究[J].国外医学•中医中药分册,2003,25(3):163.
  [6]胡春,杜文群.芝麻中抗氧化成分[J].广州化工,1996,24(1):14-18.
  [7]杨秀芳.正交实验法优选紫草得提取工艺[J].中成药,2003,27(3).
  [8]王春丽,唐汉钧,余敏英,等.麻油提取紫草工艺条件优选[J].方药缆胜,2005.
  [9]阴健.中药现代研究与临床应用[M].北京:中医古籍出版,1993:634.


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