酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究进展

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　　本文介绍酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究情况。对酶联免疫法的原理，以及在兽药残留、农药残留、生物毒素检测中的应用作了具体的介绍。并阐述了酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用前景。
　　农产品质量安全的保障，一方面靠农业生产者的自律，另一方面更需要检测技术发展的支撑。目前农产品质量安全检测技术主要有快速检测和定量检测。快速检测技术更适宜于基层监管机构、检测机构和农产品生产者使用，它具有相对简单的操作流程和技术要求。
　　一、酶联免疫法的原理
　　酶联免疫法简称酶标法（英文简称ELISA），是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术，自70年代初问世以来，迅速发展，现在已广泛用于生物学和医学科学等多个方面。酶联免疫法的原理是：抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，利用产物的量与标本中受检物质的量直接相关，从而进行定性或者定量分析。酶联免疫法常用的检测仪器是酶标仪，主要有两种常见类型手动型和全自动型。手动型靠手动移动微孔板来进行检测，一般为单通道型，仪器小巧，结构简单。全自动型酶标仪，一般采用多通道，是在手动单通道的基础上发展而来，运用微机处理系统，检测精度高、重复性好、速度快。
　　二、酶联免疫法在兽药残留检测中的应用
　　随着规模化养殖的逐渐扩大，养殖生产中兽药的使用会越来越多。不规范使用兽药和违规使用兽药的现象日益突出。特别是一些违禁兽药的使用会对人体造成极大的伤害，轻者出现过敏、恶心、呕吐，重者甚至出现中毒，引发生命危险。常规实验中畜禽水产品中检测兽药残留的方法一般是采用液相色谱法、液相色谱串联质谱法，这两类方法都需要昂贵的仪器设备，相对复杂的前处理过程，需要较多的时间，较高的实验技术水平。而酶联免疫法与其相比具有仪器设备简单、前处理过程少、时间短，适合基层人员在日常工作开展中应用。
　　畜禽产品检测中酶联免疫法的应用情况。李亚楠等采用酶联免疫法对动物组织中呋喃妥因代谢物残留进行检测，猪肉、鸡肉回收率在82.6%～104.7%，检出限为0.115、0.113μg/kg，该方法适合猪肉、鸡肉样品的检测。杨燕燕采用酶联免疫法对猪尿、猪肉和猪肝中盐酸克伦特罗进行了检测，发现在猪尿中盐酸克伦特罗的方法比较成熟，回收率可满足需要，猪肉中盐酸克伦特罗方法回收率偏低，基本可以满足需要，但是在猪肝中盐酸克伦特罗方法存在一定的差异，需要进一步改进。蜂蜜中采用酶联免疫法可检测四环素族抗生素、泰乐菌素、氯霉素残留，并有相关国家标准可以参考。
　　水产品检测中酶联免疫法的应用情况。张胜帮等采用酶联免疫分析法对水产品中氯霉素残留量进行了检测，样品回收率为92.5%～102.0%，检出限为0.009ng/ml，变异系数为3.0%，相对偏差为3.4%～7.1%，该方法适合水产品中氯霉素残留的检测。郑百芹等采用酶联免疫法开发了一种快速检测鱼肉中喹诺酮类药物的试剂盒，并检测了鱼肉样品中氧氟沙星、环丙沙星、氨氟沙星3种喹诺酮类药物，样品检测限为1μg/kg，批内、批间相对偏差均小于10%，该方法可适合鱼肉样品的检测。
　　三、酶联免疫法在农药残留检测中的应用
　　农药残留超标中毒事件，在我国时有发生，而在出口贸易中存在农药残留超标引发贸易受阻的问题也屡见不鲜。农药残留对我国蔬菜产品的质量安全和人民的健康安全具有重要的影响。果蔬中农药残留快速检测方法常用酶抑制率法和酶联免疫法。酶抑制率法方法比较成熟，但是只能用于定性判定，而且由于样品取样和操作的影响，检测结果相对误差比较大，重复性差。农残检测常用的定量检测方法一般是气相色谱法、气相色谱串联质谱法，准确度高，前处理过程复杂，仪器设备昂贵，检测时间长。酶联免疫法检测过程简单，可以大量快速筛查，目前许多国际权威分析检测农药都首选这种方法，并且很多农药类别都建立了酶联免疫法。
　　曾俊源等采用酶联免疫法测定了桃中氰戊菊酯，回收率在81%～106%，相对偏差5.1%～7.7%，检出限为0.014mg/kg，该方法可用于桃中氰戊菊酯快速的定量测定。华修德采用酶联免疫法对卷心菜、苹果、青菜样品中的甲基对硫磷、对硫磷、杀螟硫磷单个农药进行了测定，回收率在78.9%～118.1%之间，并用气相色谱法的测定结果进行了比较验证，两种分析方法的测定结果接近，表明该方法可以用于检测不同样品中有机磷农药的残留检测。
　　四、酶联免疫法在生物毒素检测中的应用
　　生物毒素是由于微生物新陳代谢过程中产生的具有危害身体健康的物质。其中的一些种类对人类危害较大，是食品污染最重要污染因素之一，而毒性最大、致癌能力强当属黄曲霉毒素，它在小麦、玉米、稻米、茶叶等农作物产品中最易感染，且不易察觉。黄曲霉毒素是一种具有双呋喃环和氧杂萘邻酮的复杂结构，已发现有B1、B2、G1、G2、M1、P1等17种多结构亚型化合物，其中以B1结构的黄曲霉毒素毒性最强，理化性质稳定，因此目前世界上都将黄曲霉毒素B1检出量作为食品黄曲霉污染和评价安全的重要指标。黄曲霉毒素常用的定量测定方法是高效液相色谱串联质谱法，测量准确度高，但是仪器设备价格昂贵，实验技术水平要求高，时间长。而酶联免疫法相比具有仪器设备便宜，操作简便，时间短的优势。
　　Stachowiak等采用酶联免疫法建立了检测黄曲霉毒素B1直接竞争法，通过对单克隆抗体准确度的实验确定了两种单克隆抗体，半抑制浓度分别是0.037ng/ml和0.031ng/ml，该方法可以用于黄曲霉毒素B1的快速刷查。谢珲等采用酶联免疫法建立了黄曲霉毒素B1间接竞争法，回收率在85%～120%内，检测限为1.04μg/l，可用于实际样品的快速检测。
　　农产品质量安全随着我国社会和经济的快速发展会越来越重要，覆盖各个层次的监管机构、检测体系也会更加完善，基层监管、检测机构和农产品生产主体在实际工作中对于快速准确的检测方法需求会更加明显。酶联免疫法具有灵敏度高、特异性强、成本低，设备简单，不需要专业的人员操作，就可以快速检测，该方法必将在基层得到大量广泛的使用，为我国农产品质量安全生产贡献重要力量。
　　（作者单位：638400四川省广安市武胜县农产品质量安全监督检验检测站）
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