三七粉对兔局部深二度冻伤创面治疗的实验研究

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　　【摘要】观察三七粉对兔局部二度冻伤创面愈合的影响。将健康大白兔30只制备冻伤模型后分为三组，观察VEGF的表达水平及统计创面愈合时间。三七粉外敷对兔局部二度冻伤创面愈合具有促进作用。
　　【关键词】三七粉；冻伤；血管内皮生长因子
　　【中图分类号】R259 【文獻标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-6681.2019.11..02
　　冻伤是寒冷地区冬季多发病，是由于低温导致全身或局部温度下降而发生的损伤，二度冻伤为有浆液性渗出皮损，损伤达真皮层，三七不仅有良好的止血效果，还可以加快创面的修复，对创面的愈合具有重要的应用价值。本实验开展三七粉外敷对兔局部二度冻伤创面愈合的机制研究，为二度冻伤创面的临床治疗探讨出一种合理有效且简单经济的治疗方法，并提供其作用的理论依据。
　　1 资料与方法
　　1.1 模型及分组
　　健康新西兰大白兔30只（雌雄不限），麻醉后10%硫化钠脱毛，将金属片（5 cm×10 cm）浸入-196℃液氮中取出立即将其贴紧兔背部裸露皮肤区10秒，使皮肤造成局部深二度以上冻伤。将制备好的大白兔模型随机分为三组，
　　A（对照组），B（常规换药组），C（三七粉外敷组）批准文号（滇20162606，云南三七科技药业有限公司）。
　　A组不做任何处置；B组常规雷夫努尔纱布包扎换药；C组用三七粉浸透纱布（1 g/cm2）外敷包扎换药。
　　1.2 样本采集
　　在模型制备后的第1、3、5、7天每组随机抽取1只动物，麻醉后在背部皮损处取一标本，大小约2 cm×1 cm。标本采集完成后，对动物继续饲养直到该动物皮损愈合。将取得的病理标本进行固定（4%甲醛溶液），并形成石蜡块，完整保存。
　　1.3 检测指标
　　用毫米方格纸法分别在第3、5、7、14天对残余皮损面积测量，并对皮损完全愈合时间进行准确计算，创面愈合判断标准为皮损的上皮化率。
　　对VEGF的表达阳性率、血管密度进行归纳、整理，并用4%甲醛溶液对标本进行固定，采取常规石蜡包埋法进行制作，形成切片。在检测时，需要进行脱蜡水化，并对抗兔VEGF抗体应用免疫组化染色，VEGF阳性评估：半定量计分法判定，并以阳性着色程度为依据进行评分。微血管的密度判定：参照 Weidner的计数方法对该指标进行计数。
　　2 结 果
　　伤后第1天每组冻伤皮损处呈现暗红色，均可见水肿和渗出。冻伤后第3天发现均处于肿胀状态，且A组、B组皮损处附着坏死组织，A组坏死灶明显，与A组坏死组织比较，B组相对较少，C组皮损处坏死组织很少。伤后第5天A组皮损处加深明显，表面坏死组织结成厚痂皮。B组皮损处表面结有薄层坏死痂皮。C组皮损处基底较湿润无明显痂皮，伤后第7天A组皮损处不仅存在较厚的坏死组织，还可见少量的分泌物；B组皮损处观察，皮损组织开始溶痂并附着少量液化坏死组织，C组皮损处基底较新鲜，部分皮损边缘上皮化。14天A组皮损处坏死痂皮部分脱落，部分皮损上皮化愈合。B组皮损处坏死组织脱落皮损边缘已上皮化愈合，中间有部分未上皮化，皮损基底较红润。C组皮损处已基本上皮化愈合。
　　对皮损VEGF表达阳性结果分析，在免疫组化染色图片中发现，血管、毛囊、皮损基底部细胞为VEGF主要分布部位。伤后第1 d，比较三组VEGF阳性率，无显著差别。
　　第3 d开始，C组表现为棕黄色的颗粒细胞显著增多，皮损VEGF阳性程度增加且速度较快，持续时间至第5 d。至第
　　7 d天时，A组VEGF表达仍处于低水平状态，而B组，VEGF有增高趋势，但是增高程度、表达强度均低于C组。
　　对皮损愈合率结果进行归纳、统计，结果显示，C组皮损愈合率最高，A组最低，对伤后第14 d结果观察，C组、A组皮损愈合率分别为（96.29±2.31）、（67.86±1.76）。皮损愈合率组间对比，有显著差异性（P<0.05）。对不同时间的组间愈合率数据对比，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　3 讨 论
　　目前用于冻伤治疗的药物不多，我国目前大力提倡中医中药发展，所以寻找一种常用中药治疗冻伤的想法油然而生。
　　三七粉是临床中医中一种传统中药，该药物具有溶解血栓、止血、扩张血管、活血化瘀及改善微循环的作用，本实验通过毫米方格法测量残余创面面积，测算皮肤上皮化率，发现三七粉外用对创面的愈合有促进作用，它不仅可以加速坏死物质清除，还具有促进成纤维细胞和上皮细胞生长的作用。可得出外用三七粉组愈合时间明显快于常规换药组及对照组。
　　VEGF是一种调控因子，对血管生成具有一定的调控作用。VEGF可以对内皮增殖、内皮迁移、血管形成等进行刺激，从而保证血管的完整性，利于血管正常状态的维持。此外，在创面愈合之中，可以将内皮因子、毛细血管数量作为其指标，若数量呈现增加趋势，则说明创面愈合效果好。在本次实验中，通过对VEGF测定，测定结果对三七粉用于创面治疗的效果予以客观证实，说明三七粉可以促进创面坏死组织清除，利于血管内皮生长因子表达，有效的缩短了创面愈合时间。
　　综上实验表明，三七粉外敷，对冻伤皮损坏死组织脱离具有加快效果，且对上皮细胞生长、血管内皮生长因子生成具有促进效果，利于冻伤皮损愈合。
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　　本文编辑：刘欣悦
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