试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法

来源:用户上传      作者:邵兵

　　摘 要：玉米是我们日常生活中常见的一种食物，含有人体所需要的各种营养物质，包括脂肪、蛋白质、碳水化合物以及各种微量元素。其中，蛋白质含量最高。蛋白质作为人体生命活动所必须的一种营养物质，可以从各种食物中都获得，玉米也是其中的一样。玉米中含有大量的蛋白质，人们经常会从玉米中摄取所需要的蛋白质。那么，玉米中到底含有多少成分的蛋白质呢？其实，是可以通过一定的测量技术计算出来的。本文将针对玉米种蛋白质含量测定的技术方法进行一定的探究，仅供参考。
　　关键词：蛋白质提取;蛋白质浓度测定;玉米
　　一、蛋白质的提取方法
　　想要从玉米中提取一定含量的蛋白质，就必须采用一定的化学药剂，这些化学药剂可以帮助实验者从玉米中提取一定数量的蛋白质，让蛋白质作为一种清晰可见的物质呈现在人们面前。另外，对于蛋白质的提取与研究也可以促进生命科学的发展，其技术的发展水平将直接影响着生命科学的发展进步。蛋白质的提取是对蛋白质进行研究的重要一步，它影响蛋白质活性的研究、产率和结构的完整性，因此，提取过程必须万无一失，采用合适的提取方式是进行蛋白质提取的第一步。
　　（一）磷酸缓冲液法
　　磷酸缓冲液法在化学实验中是一种常见的化学药剂，通常使用的有磷酸钠缓冲液（NaH2PO4&Na2HPO4）和磷酸钾缓冲液（K2HPO4&KH2PO4），由于他们有两极解离，因而被用作提取蛋白质的药剂。用这种方法进行蛋白质提取时，在存放的过程中对于温度有一定的要求，温度不宜太高，不然会破坏蛋白质的生物结构特性。这种方法，过程非常复杂，且耗时较长，但是蛋白质提取的效率很高，因而也是常用的一种提取方法。磷酸缓冲液是利用磷酸钾和磷酸钠两种化学物质配比得来的，因此，在应用的过程中，要注意两者之间的配比比例，按照一定的比例配比成功之后，才能够具体用于实验当中。
　　（二）Tris法
　　Tris缓冲溶液（英文：buffer solution）是一种能在加入少量酸或碱和水时大大减低pH变动的溶液。蛋白质作为一种物质从玉米中提取出来，在自然环境的影响下，其物质结构特性很容易受到改变，在温度、湿度以及阳光的照耀下，蛋白质的结构会被打破。而采用Tris缓冲溶液进行蛋白质的提取，可以保证蛋白质在自然环境中的ph值，可以应用这种缓冲体系来抵抗蛋白质在提取的过程中发生的ph值变化。
　　（三）TCA-acetone法
　　TCA-acetone法与其说是一种方法，还不如说是一种裂解液，在蛋白质的提取过程中，裂解液可以充分的将蛋白质从玉米中分离出来，这种利用解离液的方法相比较于前两种方法来说，其过程操作非常复杂，且每一步步骤都必须严格按照操作规则来进行，如果中间出现错误，那么就会对蛋白质的提取产生一定的影响，且会破坏蛋白质本身的结构特性。另外，这种方法对蛋白质存储的环境也有一定的要求，在高于或者低于一定范围的温度时，会破坏蛋白质本身的结构特性。蛋白质本身具有的结构特性才能在食物中提供人们身体所需要的营养物质，如果在实验中破坏了蛋白质结构，就要考虑重新进行提取与测量过程了。
　　二、蛋白质浓度测定方法
　　（一）Bradford
　　Bradford法测量蛋白质的浓度属于染料结合法的一种。蛋白质与Bradford结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速。这种测量方法所需要的实验药剂需要进行现场配比，在常温条件保存在棕色试剂瓶中三个月，但这段时间可能会出现染料的沉淀，所以每次使用前需混合均匀。在实验开始之前，进行摇晃，可以让两者之间充分混合均匀，使他们的作用能发挥到最大，在实验中能进行充分反应。
　　（二）紫外分光光度法
　　紫外线在我们的生活中是一种常见的光束，每天我们都会被紫外线照射，但是紫外线长时间的照射会对人的身体造成一定的伤害。紫外线在工业化学领域中也发挥着重要的作用，尤其是在室内实验中，紫外线的照射能发现很多化学原料内在的性质。同样的，紫外线的光照也可以测量出玉米中各个部位的蛋白质含量。在玉米中测量蛋白质含量的方法，利用的是紫外分光光度法。紫外-可见分光光度法是在190～800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。紫外分光光度法是一种采用光束对于蛋白质浓度进行测量的一种方法，因为蛋白质对于光波的吸收程度不一样，对比不同浓度下蛋白质对于光波的吸收程度，从而判断出蛋白质的浓度。
　　三、对玉米中蛋白质含量测定结果的分析
　　玉米中含有丰富的、大量的蛋白质，通过以上几种提取与测量浓度方法的分析发现，在玉米中不同部位，蛋白质含量是不同的，而要测量蛋白质的含量，就需要在實验中针对不同玉米不同部位采用不同的方法进行测定。在实际实验中，提取蛋白质的实验可以多做几组，通过应用不同的提取方法，或者实验的变量可以改为是玉米中不同的部位。最终得出不一样的结论。
　　四、小结
　　本文分析了几种提取蛋白质与浓度测量的方法。在实际的实验过程中，实验者应当根据现场的自然环境确定采用何种方法，避免外界环境对蛋白质的结构性质产生影响，同时也要保证蛋白质的生物结构特性在提取、测量的过程中不会发生变化。本文针对玉米中含有的蛋白质含量进行了探究，首先探讨了玉米中提取蛋白质的方法，主要有磷酸缓冲液法、Tris法、TCA-acetone法，这三种方法都是采用化学试剂完成的，因而在实验中要注意试剂的配比与反应，另外，化学试剂在实际环境中具有一定特殊的性质，可能会发生挥发，也可能会发生氧化，因而要注重化学试剂的保存方法。其次，介绍了蛋白质含量的测定方法，即测量在玉米中含有多少蛋白质，应用的方法有Bradford和紫外分光光度法，对于测量方法的应用，研究者在实验的过程中要充分考虑实验环境的情况，确定采用哪种方法才是最为合适的，对测量结果进行最终的总结与分析。
　　参考文献：
　　[1]张龙翔，张庭芳，李令媛.生化实验方法和技术[M].北京：高等教育出版社，1981：164-169.
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