咳可合剂对哮喘发作期小鼠肺组织ET-1 血清I L-4 IFN-γ水平的影响研究

来源:用户上传      作者:

　　摘要：目的 咳可合剂为本院儿科院内制剂，前期研究表明咳可合剂能明显改善热哮患儿咳嗽、喘息、痰鸣等主要症状及体征，可以改善患儿肺功能指标;可通过调节患儿诱导痰中EOS及血清中ECP水平，减轻哮喘患儿的病理变化从而控制哮喘的发作。为了探讨咳可合剂作用机制，特进行本实验研究。方法 按照参考文献制备哮喘小鼠模型，分为空白对照组、模型对照组、咳可合剂低、中、高剂量组五组，各组小鼠从造模成功后第2天起灌胃，每次2 mL，每天1次，持续1周。中药治疗组分别给予咳可合剂药液;正常对照组和模型对照组均给予生理盐水灌胃1周，处死动物，取肺组织检测ET-1，血清检测IFN-r和IL-4。结果 与空白组比较，模型组ET-1、IL-4值均升高，P<0.05有统计学意义，IFN-γ值下降，P<0.05有统计学意义，IFN-γ/IL-4比值下降，P<0.05有统计学意义。咳可合剂三个剂量组均能降低ET-1、IL-4值，P<0.05有统计学意义;均能提高IFN-γ、IFN-γ/IL-4值，P<0.05有统计学意义。结论 咳可合剂通过降低值肺组织ET-1含量，及提高血清IFN-γ水平，拮抗哮喘小鼠IL-4分泌水平，从而达到调Th1/Th2 平衡发挥作用。
　　关键词：咳可合剂 小鼠、ET-1、I L-4、IFN-γ
　　中图分类號：R256.12 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2019）02-0062-02
　　近20年来随着工业化进程的加速以及人们生产及生活方式的改变，小儿哮喘的发病率呈逐年上升趋势。前期研究表明[1]：咳可合剂能明显改善热哮患儿咳嗽、喘息、痰鸣等主要症状及体征，可以改善患儿肺功能指标;可通过调节患儿诱导痰中EOS及血清中ECP水平，减轻哮喘患儿的病理变化从而控制哮喘的发作。为了探讨咳可合剂作用机制，特进行本实验研究。
　　1 材料与方法
　　1.1 实验动物 健康雌性BALB/c纯系小鼠50只，苏州大学医学院动物实验中心提供。动物许可证号：SYXK（苏）2012-0045。
　　1.2 药物与试剂
　　1.2.1 实验药物 咳可合剂组方：炙麻黄、杏仁、生石膏、炙甘草、蒲公英、金银花、野菊花、青黛、地龙、蜈蚣。由苏州中医院中药研究所提供。咳可合剂低中高组分别按所用药物及组方比例称取各药混合，浓缩至含生药、0.95 g，1.9 g，3.8 g/L。
　　1.2.2 主要实验试剂 鸡卵清白蛋白（ovalbumin，OVA）：美国Sigma公司;氢氧化铝干粉：苏州科创生物科技有限公司;ELISA小鼠ET-1试剂盒、IFN-r和IL-4免疫组化试剂盒：苏州科创生物科技有限公司。
　　1.2.3 主要仪器设备 雾化机：江苏鱼跃医疗设备股份有限公司，型号403 C型。
　　1.3 方法
　　1.3.1 动物模型制备及评估 哮喘模型小鼠参考文献[2]造模方法的建立分致敏和激发两步。除正常对照组外，其余4组于第 1、8d腹腔注射抗原液 0.2mL/只（含卵蛋白 100μg，吸附白百破联合疫苗0.1 mL和氢氧化铝干粉1 mg）致敏。正常对照组腹 腔注射等量生理盐水。自第14d开始将小鼠放人不完全封闭的有机玻璃箱内，5组1%卵蛋白（OVA）生理盐水溶液喷雾进行激发，每天1次，每次20 min，定时连续，共激发7d，以小鼠出现点头呼吸，缩胸收腹，呼吸急促，喷嚏咳嗽为诱喘成功。正常对照组喷雾等量生理盐水。咳可合剂低中高组分别按所用药物及组方比例称取各药混合，放置冰箱冷藏（4℃）备用。
　　1.3.2 给药方法 各组小鼠从造模成功后第2 d起灌胃，每次2 mL，每天1次，持续1周。低中高治疗组分别给予咳可合剂药液;空白对照组和模型对照组均给予生理盐水灌胃。各组药物灌服前均在恒温水浴箱内加热至37℃。
　　1.4 检测指标 血清实验第8 d，激发后（哮喘发作期）固定小鼠，眼球取血0.5 mL，注入抗凝管中，静置30 min后2000 r/min离心15 min，分离血清检测I L-4、IFN-γ水含量;取左肺组织冻存匀浆，检测ET-1。均按照说明书进行。空白组同上。
　　1.5 统计处理 所有数据录入SPSS21软件，经检测正态分布且方差齐，采用方差分析检测方法，如不满足方差齐性，则采用非参数检验。以P<0.05为有统计学差异。
　　2 结果
　　与空白组比较，模型组ET-1、IL-4值均升高，P<0.05有统计学意义，IFN-γ值下降，P<0.05有统计学意义，IFN-γ/IL-4比值下降，P<0.05有统计学意义。咳可合剂三个剂量组均能降低ET-1、IL-4值，P<0.05有统计学意义;均能提高IFN-γ、IFN-γ/IL-4值，P<0.05有统计学意义。
　　3 讨论
　　气道重塑是哮喘的重要病理特征之一，是呼吸道炎症反复损伤和修复的结果。内皮素-1（ET-1）是迄今发现的最强的支气管平滑肌收缩剂，它可通过活化肺泡巨噬细胞、增加超氧化物的产生以及激活中性粒细胞，增强弹性蛋白酶活性，使上皮细胞破坏增加，引起黏液高分泌致狭窄[3]。近年来研究证实Th1/Th2细胞因子水平稳态破坏亦是诱发、维持哮喘的重要因素[4];Th2细胞因子水平优势导致气道高反应性进展。其中IFN-γ和IL-4分别是Thl和Th2细胞因子代表类型;IL-4能够诱导B细胞增殖分化，促进IgE分泌，加重气道炎症;而IFN-γ则具有高效IgE分泌拮抗作用，可有效降低Th2型细胞因子水平。二者失衡是哮喘的重要特征，也是发病机制之一。
　　咳可合剂为本院儿科多年临床经验结合经典方剂组合而成，麻杏石甘汤清肺平喘为本。不用大苦大寒之品，咳可合剂使用清热解毒之品，如蒲公英、金银花、野菊花、青黛等，而不用黄连、黄柏之类，因为蒲公英之类清热解毒，苦味不甚，小儿易于接受，且大苦大寒易于伤阴伤阳、败伤胃气。止咳化痰，辅以解痉通络。咳可合剂以地龙、蜈蚣解痉止咳平喘。
　　结果表明，模型小鼠肺组织ET-1、血清IL-4值均升高，IFN-γ值下降，这与文献报道发病机制相符，说明造模成功。咳可合剂三个剂量组均能降低ET-1、IL-4值，均能提高IFN-γ、IFN-γ/IL-4值，提示咳可合剂通过降低值ET-1含量，及提高血清IFN-γ水平，拮抗哮喘小鼠IL-4分泌水平，从而达到调Th1/Th2 平衡发挥作用。
　　参考文献：
　　[1]李岩，符虹，楚建业，等.咳可合剂对热性哮喘发作期儿童肺功能、诱导痰中 EOS及血清 ECP的影响[J].湖南中医杂志，2014，30（4）：18-20.
　　[2]AnthonyT，Nials and Sorif Uddin.Mouse models of allergic asthma：acute and chronic allergen challenge[J].Dis Mdoel Mech.2008，1（4-5）：213-220.
　　[3]0toA，Tamm EP，8zklarukJ Multidetectorr OWCtof thel iver Radio l01 in NorthAm，2005，43（5）：827-848.
　　[4]Hansbro PM，Kaikc GE，Foster PS.Cytokine/anti-cytokine therapy-novel treatments for asthma[J].BrJ Pharmacol，2011，163（1）：81-95.
转载注明来源:https://www.xzbu.com/6/view-14764280.htm