痰TB-RNA检测在肺结核中的诊断价值

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　　【摘要】 目的 探讨痰结核菌核糖核酸（TB-RNA）检测应用在肺结核中的诊断价值。方法 321例活动性肺结核患者作为试验组， 62例肺部其他疾病患者作为对照组。采集两组患者痰液进行TB-RNA检测法、涂片镜检法和罗氏培养法检验， 比较两组患者阳性检出率， 并观察三种检测方法的检测特点。结果 试验组患者TB-RNA法阳性检出率为85.05%， 明显高于罗氏培养法的74.77%、涂片镜检法的28.04%， 罗氏培养法阳性检出率高于涂片镜检法， 差异具有统计学意义（P<0.05）。对照组患者TB-RNA法阳性检出率为0， 罗氏培养法阳性检出率为3.23%， 涂片镜检法阳性检出率为0， 比较差异无统计学意义（P>0.05）。TB-RNA检测法的特点是检测周期适中（40 min）， 可鉴别活菌并能区分结核与非结核分枝杆菌。结论 痰TB-RNA检测在肺结核中具有阳性检出率高， 检测周期短， 并可鉴定活菌等优点， 值得推广。
　　【关键词】 肺结核;结核菌核糖核酸检测;诊断
　　【Abstract】 Objective To discuss the diagnostic value of sputum tuberculosis ribonucleic acid （TB-RNA） detection in pulmonary tuberculosis. Methods A total of 321 patients with active pulmonary tuberculosis were taken as experimental group and 62 patients with other pulmonary diseases were taken as control group. The sputum samples of the two groups were collected for TB-RNA detection， smear microscopy and Roche culture. The positive detection rates of the two groups were compared， and the detection characteristics of the three detection methods were observed. Results The positive detection rate of TB-RNA method was 85.05% in the experimental group， which was significantly higher than that of Roche culture method （74.77%） and smear microscopy method （28.04%）. The positive detection rate of Roche culture method was higher than that of smear microscopy （28.04%）. Their difference was statistically significant （P<0.05）. The positive detection rate of TB-RNA method was 0 in control group， 3.23% in Roche culture method and 0% in smear microscopy method. Their difference was not statistically significant （P>0.05）. TB-RNA assay was characterized by moderate detection cycle （40 minutes）， and it can identify live bacteria and distinguish between tuberculosis and non-tuberculosis mycobacteria. Conclusion Sputum TB-RNA detection in tuberculosis has the advantages of high positive detection rate， short detection cycle and identification of live bacteria. So it is worthy of promotion.
　　【Key words】 Pulmonary tuberculosis; Detection of tuberculosis ribonucleic acid; Diagnosis
　　肺結核疾病较常见， 其在全球范围内流行感染， 根据世界卫生组织2017年结核病疫情报告， 我国是肺结核疾病高负担的国家。结核病作为一类慢性的传染性疾病， 主要是结核分枝杆菌（Mtb）传染感染[1]。肺结核主要有原发性、血行播散性、继发性肺结核、气管支气管结核以及结核性胸膜炎[2]。肺结核疾病不仅给患者带来身体不适， 如导致患者出现身体乏力、低热、呼吸困难以及消瘦等不良症状， 也会影响患者的生活质量， 由于其具有感染性会给患者在工作和社交方面带来不便[3]。TB-RNA检测方法是通过RNA恒温扩增技术发展起来， 不同于其他检测方法， 可快速准确地判断Mtb的存在[4]。本研究选取2016年1月～2017年12月本院治疗的383例肺部疾病患者作为研究对象， 探讨痰TB-RNA检测在肺结核中的诊断价值， 现将研究结果报告如下。
　　1 资料与方法
　　1. 1 一般资料 选取2016年1月～2017年12月内蒙古自治区第四医院治疗的383例肺部疾病患者作为研究对象， 其中321例活动性肺结核患者作为试验组， 62例肺部其他疾病患者作为对照组。试验组中确诊275例患者为肺结核疾病， 46例患者为临床诊断肺结核疾病;男211例， 女110例; 年龄18～65岁， 平均年龄（41.24±12.46）岁。对照组患者中男39例， 女23例;年龄28～68岁， 平均年龄（43.31± 10.18）岁;慢性支气管炎32例（51.61%）， 肺炎15例（24.19%）， 肺癌5例（8.06%）， 非结核分枝杆菌肺病2例（3.23%）， 结节病2例（3.23%）， 支气管扩张4例（6.45%）， 尘肺2例（3.23%）。两组患者年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。 　　1. 2 纳入及排除标准 纳入标准[5]：①活动性肺结核研 究对象诊断依据为《肺结核诊断和治疗指南》;②研究对象愿意配合治疗。排除标准[6]：①患有艾滋病病毒（HIV）感染及严重的全身疾病;②患有精神疾病;③同时参与其他研究项目。
　　1. 3 方法 采集两组研究对象在早餐后的痰液作为标本， 每个标本分3份分别通过罗氏培养法、涂片镜检法以及TB-RNA法进行检测， 具体方法如下。
　　1. 3. 1 TB-RNA检测方法 使用SArTB试剂盒， 具体操作为：①将标本和TB裂解稀释缓冲液按照1∶100进行混合稀释， 用C5H10O3处理的无菌水制备10 mmol/L柠檬酸钠为TB裂解稀释缓冲液。②将稀释的溶液采用超声波清洗仪进行超声处理， 超声条件设定为300 W、15 min。③在超声结束后， 采用移液枪吸取2 μl加入倒30 μl扩增检测液（pH为8.1的40 mmol/L的Tris-Hcl缓冲液）中。④按操作说明设定恒温荧光检测仪的实验参数， 荧光素通道为6-羧基荧光素（42℃， 1 min）， 共40个循环;1 min记录1次荧光信号， 共检测40次。⑤反应结束后， 在温度42℃条件下保温5 min（恒温混匀仪）;同时将预热到42℃的SAT酶液（2000 U的T7 RNA转录酶和2000 U的M-MLV逆转录酶）加入到反应管中， 迅速放入恒温荧光检测仪中检测。实验用试剂与设备：恒温混匀仪（上海精宏实验设备有限公司）， 恒温荧光检测仪（上海精宏实验设备有限公司）， SArTB试剂盒（上海仁度生物科技有限公司）。
　　1. 3. 2 罗氏培养法 进行菌种鉴定， 针对检测出培养阳性的标本， 确定分枝杆菌种类。
　　1. 3. 3 涂片镜检法 按《结核病诊断细菌学检验规程》中萋-尼氏抗酸染色镜检的相关方法进行操作。
　　1. 4 观察指标 比较两组患者阳性检出率， 并观察三种检测方法的检测特点。
　　1. 5 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验;计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
　　2 结果
　　2. 1 两组阳性检出率比较 试验组患者TB-RNA法阳性检出率为85.05%， 明显高于罗氏培养法的74.77%、涂片镜检法的28.04%， 罗氏培养法阳性检出率高于涂片镜检法， 差异具有统计学意义（P<0.05）。对照组患者TB-RNA法阳性检出率为0， 罗氏培养法阳性检出率为3.23%， 涂片镜检法阳性检出率为0， 比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。
　　2. 2 三种检测方法的检测特点 TB-RNA检测法的特点是检测周期适中（40 min）， 可鉴别活菌并能区分结核与非结核分枝杆菌。见表2。
　　3 讨论
　　对于活动性肺结核能够快速判断出病症是控制病情发展和恶化的关键环节， 现在对于快速诊断尚未达到理想的要 求[7]。目前患者在医院进行诊治要经过数天后检查才会确诊肺结核疾病， 容易错过病症的最佳治疗期， 拖延病情[8]。由于科学技术的快速发展， 近些年来分子生物学技术诊断此病发挥了很大的价值。
　　本研究结果显示， 试驗组患者TB-RNA法阳性检出率为85.05%， 明显高于罗氏培养法的74.77%、涂片镜检法的28.04%， 罗氏培养法阳性检出率高于涂片镜检法， 差异具有统计学意义（P<0.05）。对照组患者TB-RNA法阳性检出率为0， 罗氏培养法阳性检出率为3.23%， 涂片镜检法阳性检出率为0， 比较差异无统计学意义（P>0.05）。再根据三种检测方法的特点进行观察发现， TB-RNA检测法的特点是检测周期适中（40 min）， 可鉴别活菌并能区分结核与非结核分枝杆菌。医院现在对肺结核疾病的诊断暂无快速诊断的方法， 使用TB-RNA检测方法不仅可以减少检测诊断的时间， 缩短临床确诊周期， 还能提高阳性检出率， TB-RNA检测法是将16S rRNA作为检测靶标， 再扩增靶标的片段， 将荧光探针与靶标片段的扩增产物杂交后， 释放出荧光信号， 再实时检测荧光信号， 因此快速准确地判断结核分枝杆菌的存在[9， 10]。
　　综上所述， 痰TB-RNA法阳性检出率较高， 检测周期短， 为诊断肺结核提供更为快速和准确的检测手段， 值得推广。
　　参考文献
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　　[收稿日期：2018-11-06]
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