牙体脱钙法和劈牙取髓法观察牙髓组织中VEGF表达的效果比较
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【中图分类号】R781 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)12－0293－01
【摘要】目的 通过观察牙髓组织中VEGF（血管内皮因子）的表达情况，比较牙体脱钙法和劈牙取髓法染色效果的不同，探究牙体脱钙法在牙髓免疫组织化学研究中是否具有更优的临床意义。方法 选择2011年1月-2011年9月期间于我院口腔科就诊的需正畸治疗的26例患者的左右两侧的健康下颌前磨牙共52颗作为试验对象，分别采用牙体脱钙法和劈牙取髓法制作成切片，经免疫组化染色后，观察两组切片中牙髓组织中VEGF的表达情况。结果 采用牙体脱钙法制作的切片，染色效果较好，各细胞、结构显现清楚，过度明显，组织染色对比强，可确切观察到VEGF的阳性部位。劈牙取髓法制作的切片，染色效果较差，各细胞、结构显现模糊，相互交错，残缺不全。统计数据表明，采用牙体脱钙法制备的标本中显示的成纤维细胞个数、阳性细胞数明显多于劈牙取髓法组制备的标本，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 牙体脱钙法与劈牙取髓法在观察牙髓组织中VEGF的表达效果的比较中，前者免疫组化的染色效果较好，图像清楚，具有更优的价值。
【关键词】牙体脱钙法；劈牙取髓法；VEGF；
牙髓是牙体的重要组成部分，是一种疏松结缔组织，质软，受挤压或牵拉时容易变形，其周围包覆着致密、坚硬的牙体组织，主要由无机盐构成，易碎但难以切割［1］。牙髓的健康与否直接关系到牙体的营养供给、感觉的产生与传导以及牙体破损后的修复等，因此受到众多的临床关注。传统获得牙髓的方法主要是劈牙取髓法，但由于其局限性已逐渐被淘汰，目前临床较多采用的是通过牙体脱钙法制备牙髓联合切片进行观察［2］。随着医疗技术的发展及研究的深入，临床已逐渐接受通过观察牙髓组织中VEGF的表达情况来协助某些牙髓疾病的诊断和治疗。
1 资料和方法
1.1 一般资料 选择2011年1月-2011年9月期间于我院口腔科就诊的需正畸治疗的26例患者的左右两侧的健康下颌前磨牙共52颗作为试验对象，标本均需拔除，根尖孔已完全闭合。本组患者年龄13-26岁，平均（19+3.7）岁，男17例，女9例。将拔除的标本分为两组，A组为26例患者左侧下颌前磨牙，采用劈牙取髓法获取牙髓标本并制备成切片；B组为26例患者右侧下颌前磨牙，采用牙体脱钙法制作成牙体牙髓联合切片。本组患者处需牙齿正畸治疗外无其他口腔疾病，且无其他脏器的严重疾病或全身性疾病。近期无特殊服药史。手术均经患者同意后进行。
1.2 标本处理 将拔除的牙体置于生理盐水中保管，并清理干净牙周其他组织。两组分别采用不同方法制备成组织切片。A组采用劈牙取髓法，劈开牙体后，用探针剥离牙髓组织，获取牙髓后经常规固定、脱水、透明及石蜡包埋，制成切片。B组采用牙体脱钙法，首先用甲醛固定，再将牙体外形打磨均匀，再固定一天后将标本置于快速脱钙液中浸泡，保持37℃恒温，牙体软化后将其取出，再经脱水、透明及石蜡包埋，制成切片。将两组制备成的切片分别进行HE染色，免疫组化染色及阴性对照。免疫组化染色方法根据试剂盒说明进行，阴性对照采用PBS液，阳性对照为试剂盒所提供。
1.3 结果分析 于光镜(×400)观察两组切片，随机选取8个染色效果较好的视野，观察并记录成纤维细胞的个数，计算平均值。利用计算机图像分析系统，分析两组成纤维细胞染色部位的平均光密度值（MOD）。
1.4 统计学处理 计量资料以x+s 表示, 采用t 检验，取α=0.05 为检验水准。
2 结果
采用牙体脱钙法制作的切片，染色效果较好，各细胞、结构显现清楚，过度明显，组织染色对比强，可确切观察到VEGF的阳性部位。劈牙取髓法制作的切片，染色效果较差，各细胞、结构显现模糊，相互交错，残缺不全。统计数据表明，采用牙体脱钙法制备的标本中显示的成纤维细胞个数、阳性细胞数明显多于劈牙取髓法组制备的标本，差异具有统计学意义（P<0.05）。详见表1.
表1
3 讨论
本组研究表明，牙体脱钙法与劈牙取髓法在观察牙髓组织中VEGF的表达效果的比较中，前者免疫组化的染色效果较好，图像清楚，具有更优的价值。牙体脱钙法的优点主要是其制备过程中避免了直接破坏牙体，可保留相对完整的牙髓组织，这样便能够真实地显现牙髓组织内的细胞及结构［3］。
另外，牙体脱钙法的标本制备应当注意，牙体外周致密坚硬，固定液较难进入牙髓，因此本实验中采取了固定-二次固定-脱钙的程序，如此可加速脱钙过程［4］。
综上所述，与传统的劈牙取髓法相比，牙体脱钙法虽然时间较长，但其可使牙髓组织保存完整，染色效果好，图像显示清楚，结果真实直观，具有一定的临床意义。
参考文献
［1］ 王青, 林秀娟, 林志勇, 等. 血管内皮生长因子在人年轻恒牙及成熟恒牙牙髓中的表达［J］.上海口腔医学, 2005,16(3):285-289
［2］ 包穆蓉. VEGF及其受体Flt??1 在实验性鼠牙髓炎中的表达及意义［D］.中国优秀硕士学位论文全文数据库, 2004.
［3］ MantelliniMG, Botero T, Yam an P, eta.l Adhesive resin and the hydrophilic monomer H EMA induce VEGF express ion dental cells and macrophages［J］.DentMater, 2006, 22( 5): 434- 440.
［4］ 王亚红, 蒋勇. 牙及牙周组织联合切片制作技术现状与进展［J］.中国实用口腔科杂志, 2008,1(12):747- 749.
作者单位：330000 江西省南昌市第一医院口腔科
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