维生素B6片溶出度方法学研究

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　　【摘 要】目的：建立维生素B6片溶出度检测方法。方法：采用桨法，以900ml水为溶出介质，转速为50rpm，选取时间为30min，采用高效液相色谱法测定维生素B6片的溶出量，检测波长为291nm。结果：维生素 B6浓度在4.24μg/ml～12.71μg/ml范围内线性关系良好，r=0.999，平均回收率为100.9%，RSD为0.66%，溶出限度为标示量的 85%。结论：该方法简便、灵敏、准确，可用于维生素B6片的溶出度测定。
　　【关键词】维生素B6片;溶出度;高效液相色谱法
　　中图分类号： R927.2 文献标识码： A 文章编号： 2095-2457（2019）07-0202-004
　　DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.07.084
　　【Abstract】Objective：To establish a test method for determining the vitamin B6 tablets dissolution.Methods：Paddle method was used with 900m L of distilled water as the dissolution medium at the rotation speed of 50 rpm and samples were taken after 15min.vitamin B6 tablets dissolution quantity determined by HPLC with the detection wavelength of 291nm.Results Vitamin B6 concentration had a good linear relationship with the absorbance in 4.24μg/ml～12.71μg/ml，r=0.999，the average recovery was 100.9%（RSD1.0%）.The dissolution limit of the labeled amount is 85%.Conclusion：The method is simple，sensitive and accurate that can be used for the dissolution determination of vitamin B6 tablets.
　　【Key words】Vitamin B6 tablets;Dissolution;HPLC
　　维生素B6为水溶性维生素，与体内辅酶代谢密切相关，除维持正常生理作用外，还可治疗贫血、白细胞减少、口腔溃疡、帕金森综合征等多种疾病。用于预防和治疗维生素B6缺乏症，如脂溢性皮炎、唇干裂等，也可用于减轻妊娠嘔吐。此外，维生素B6还是抢救异烟肼中毒的重要药品。2015版《中国药典》二部维生素B6片项下未有溶出度检查项[1]，亦未见有关本品溶出度方法的文献报道。溶出度是评价口服固体制剂质量的重要指标，本文采用HPLC法对维生素B6片溶出度方法进行考察，以控制其质量。
　　1 仪器与试药
　　1.1 仪器
　　Ultimate 3000型高效液相色谱仪（戴安公司），LC-20A型高效液相色谱仪（岛津公司），Thermo C18，4.6×150mm，5μm色谱柱（Thermo），Wonda Cract ODS-2，4.6×150mm，5μm色谱柱（岛津公司），FADT-801QY型溶出仪（上海富科思分析仪器有限公司）。
　　1.2 试药
　　1-戊烷磺酸钠（H1526018，阿拉丁），甲醇（862116，RiMedco），冰乙酸（20160908，天津市永大化学试剂有限公司），维生素B6对照品（100116-201404，中国食品药品检定研究院），维生素B6片（批号：Y180601、Y180602、Y180603，西南药业股份有限公司）
　　2 方法与结果
　　2.1 溶出方法建立
　　2.1.1 溶出介质的配制：介质1为纯化水（经脱气处理）;介质2为盐酸溶液（pH1.2）即7.65ml 盐酸，以纯化水稀释至1000ml，即得;介质3为醋酸盐缓冲液（pH4.0），即取醋酸钠（三水合物）1.22g加水溶解，加入2mol/L醋酸溶液20.5ml，加水稀释至1000ml，即得;介质4为磷酸盐缓冲液（pH6.8）），即取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液 250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用纯化水稀释至1000mL，即得。
　　2.1.2 对照品溶液配制：取维生素B6对照品21.22mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。
　　2.1.3 溶出曲线的测定：取本品1片，照溶出度测定法（《中国药典》2015年版四部通则0931第二法），取上述溶出介质900ml，转速为每分钟50转，在5、10、15、30min时取样，按《中国药典》2015版第二部维生素B6含量测定方法测定[1]，绘制溶出曲线。
　　2.2 溶出方法学验证
　　2.2.1 辅料干扰试验：（1）空白辅料：按一片处方量精密称取辅料，置100ml的量瓶中，加水超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。（2）供试品溶液：取维生素B6片，按2.1.3溶出度法经30分钟时，取溶液8ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密量取空白辅料溶液、维生素B6对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图（见图1），由图可知空白辅料对维生素B6无干扰。 　　2.2.2 滤膜吸附试验：取维生素B6片，按2.1.3溶出度法经30分钟时取样，分别于离心机（4000转，10min）离心和0.45μm滤膜过滤;用0.45μm滤膜滤过，分别弃去初滤液1、2、3、4、5ml;取续滤液，作为供试品溶液。精密量取上述溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图峰面积。结果显示供试品溶液采用离心以及0.45μm滤膜过滤处理后，主峰面积无明显变化，RSD为0.37%，小于2.0%，说明滤膜不干扰溶出含量测定。
　　2.2.3 稳定性试验：取维生素 B6片，按2.1.3溶出度法经30分钟时，取溶液8ml，用0.45μm的滤膜滤过，室温放置0，5，10，14，18，23，28，36小时，精密量取各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图峰面积，计算峰面积的RSD%。实验结果显示，室温条件下36小时内，供试品峰面积RSD为0.70%，说明本品室温36小时内稳定。
　　2.2.4 线性与范围：精密称取维生素B6对照品21.22mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取上述溶液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。由数据可知线性方程为y=24908648.400x-1992617.400，r=0.999，证明维生素B6在4.24μg/ml～12.71μg/ml的范围内浓度和峰面积之间线性关系良好。
　　2.2.5 回收率试验：精密称称取维生素B6对照品10、16、20mg，按浓度50%、80%、100%各平行称取3份，分别置100mL量瓶中，再分别加入混合辅料（相当于1 片制剂的量），用水溶解并稀释至刻度，摇匀。经0.45μm滤膜过滤，取滤液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图（结果见表1）。
　　由以上数据表明，本方法供试品的低（50%）、中（80%）、高（100%）浓度水平的回收率为99.51%～101.67%之间，均在98.0%～102.0%范围内，平均回收率为100.9%，RSD为0.66%，说明本方法准确度良好。
　　2.2.6 重复性试验：取维生素B6片6片，按2.1.3溶出，按《中国药典》2015版第二部维生素B6含量测定方法测定5、10、15、30min時溶出量，实验结果显示所有样品5min取样点的溶出度量含量RSD均小于20.0%，其它不同取样时间点溶出度含量RSD均小于10.0%，说明此方法重复性良好。
　　2.2.7 耐用性试验：改变溶出的温度（37℃±2℃）及转速（50±5转），其平均溶出度的RSD均在2%以内，说明其改变溶出的温度对溶出的影响较小。改变检测器波长（±2nm）、流速（±0.2l/min）m、柱温（±5℃）、流动相pH（±0.1）、流动相比例（±2），采用不同色谱柱、高效液相色谱仪和溶出仪时，平均溶出度为98.7%，RSD为0.77%，小于2.0%，对溶出度测定无影响，说明该测定方法的耐用性较好，满足溶出测定要求。
　　2.3 样品溶出度的测定和限量标准的设定
　　应用建立的方法对批号为Y180601、Y180602、Y180603的样品进行溶出度测定，结果如表2所示，3批样品的平均溶出度均在90%以上，将取样点溶出量减掉15%作为溶出限度[2，3]，故溶出限度设定为标示量的85%。
　　3 讨论
　　本文同时利用高效液相色谱法和紫外分光光度法测定维生素B6的含量，发现紫外分光光度法较高效液相色谱法所测含量较低，说明用紫外分光光度法测定该品的测定有干扰，故选择高效液相色谱法测定溶出度。用紫外扫描维生素B6水溶液在291nm处有最大吸收，故拟定检测波长为291nm，与2015版《中国药典》二部维生素B6含量测定所用检测波长一致。
　　考察了四种溶出介质对溶出曲线的影响，结果（图1）显示维生素B6片在4种溶出介质中均稳定，其溶出曲线很相似，说明溶出介质的pH值和离子强度对其溶出行为无显著影响，由于水作为溶出介质操作相对方便，所以选择水作为溶出介质。用本法测定维生素B6片的溶出度具有稳定性好，回收率高，精密度佳等特点，为维生素B6片溶出度测定质量标准的建立提供了科学数据和方法基础。
　　【参考文献】
　　[1]国家药典委员会.《中国药典》二部[S].2015.
　　[2]谢沐风.如何科学、客观地制订溶出度试验质量标准[J]. 中国医药工业杂志，2012，43（3）：A23.
　　[3]张启明，谢沐风，宁保明，等.采用多条溶出曲线评价口服固体制剂的内在质量[J].中国医药工业杂志，2009，40（12）：946.
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