有效选择沙门氏菌培养基
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作者:赵玮 郭龙宗 张孝兰 李燕 石海春 王雪梅 侯珍珍
中图分类号：S858.31 文献标识码：C 文章编号：1673-1085（2020）3-0046-03
沙门氏菌病为人畜共患病，在食品安全及公共卫生上极为重要。沙门氏菌无处不在，广泛分布于各种动物和环境中。沙门氏菌可存在于鸡群中，但并不一定引起发病，在鸡群受到应激或垂直传播时可引起种鸡或雏鸡发病。沙门氏菌抵抗力较强，在环境中可长期存活，在蛋壳表面可存活200d，在尘埃中可存活3年之久，对阳性鸡舍进行彻底消毒十分困难。所以在养殖生产过程中，对鸡群生长环境进行沙门氏菌检测尤为重要，本文就针对怎样有效的从污染物中分离沙门氏菌以及选用什么样的培养基分离培养沙门氏菌做了一系列的实验，供大家参考。
1 实验原理、方法
1.1 我们首先将容易干扰沙门氏菌生长的革兰氏阴性细菌（大肠杆菌、变形杆菌）与沙门氏菌接种到不同的培养基，再将常见的不同血清的沙门氏菌接种到不同培养基，观察其生长形态，结合两组实验结果选择培养基的优势组合来有效的鉴别沙门氏菌。
1.2 由于环境中存在的大多数沙门氏菌为肠炎型的沙门氏菌，通过添加少量肠炎型沙门氏菌，人工模拟鸡舍内沙门氏菌阳性的垫料，用不同的增菌液增菌，再传代到沙门氏菌选择性培养基，依据从污染物中检出沙门氏菌的结果，选择优势的增菌液与鉴别培养基。
2 实验试剂、材料
2.1 实验试剂 普通营养琼脂，麦康凯琼脂，SS琼脂，亮绿琼脂（BG），DHL琼脂，XLD琼脂，XLT4琼脂，缓冲蛋白胨水（BPW），亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC），氯化镁孔雀绿增菌液（MM），液体连四硫酸盐（USP）（FTM）带有配套试剂碘液和煌绿，以上试剂均购买自青岛海博生物有限公司，沙门氏菌单因子诊断血清购自宁波天润生物药业有限公司，生理盐水、蒸馏水。
2.2 实验材料 肠炎型沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、变形杆菌（均为已鉴定的纯化菌株），木花、稻壳（沙门氏菌阴性），鸡粪（沙门氏菌阴性），移液器（20～200μL、100～1000μL），吸头（200μL、1000μL），接种针，酒精灯，三角烧瓶，平口试管带试管塞，平皿。
3 实验步骤
3.1 鉴别培养基的选择
3.1.1 制备琼脂平板：按照产品说明将普通营养琼脂、麦康凯琼脂、SS琼脂、BG琼脂、DHL琼脂、XLD琼脂、XLT4琼脂制备成琼脂平板。
3.1.2 将大肠杆菌、变形杆菌、肠炎型沙门氏菌的纯化的菌株传代于普通营养琼脂、麦康凯琼脂、SS琼脂、亮绿琼脂、DHL琼脂、XLD琼脂、XLT4琼脂、倒置于37℃温箱中培养24h。
3.1.3 菌株在不同培养基的鉴别结果见图1。
由图1可见，普通营养琼脂可以区分变形杆菌与肠炎型沙门氏菌，但不宜区分大肠杆菌与肠炎型沙门氏菌;DHL琼脂、麥康凯琼脂可以区分大肠杆菌与肠炎型沙门氏菌，但不宜区分变形杆菌与肠炎型沙门氏菌;亮绿琼脂不宜区分大肠杆菌、肠炎型沙门氏菌、变形杆菌;SS、XLD、XLT4可以明显的区分大肠杆菌、肠炎型沙门氏菌、变形杆菌。
3.1.4 将鸡白痢沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎型沙门氏菌分别接种于普通营养琼脂、麦康凯琼脂、SS琼脂、XLT4琼脂，倒置于37℃温箱中培养24h，结果见图2。
由图2可以看出：普通营养琼脂、SS琼脂、麦康凯、XLT4可以区分鸡白痢沙门氏菌与肠炎型沙门氏菌，XLT4可以区分鸡白痢沙门氏菌、肠炎型沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌。
由以上结果可以看出，在分离培养沙门氏菌时可以选用普通营养琼脂、SS琼脂、XLT4琼脂、麦康凯琼脂组合，这样可以快速有效地发现沙门氏菌的可疑菌落。
3.2 增菌液的选择
3.2.1 菌液制备 将纯化的肠炎型沙门氏菌涂于平板37℃温箱培养24h，用生理盐水稀释，用平板点样计数法调菌液浓度为102、103CFU/mL。
3.2.2 垫料的制备 Ⅰ组只将木花和稻壳混合不加鸡粪;Ⅱ组将木花、稻壳、鸡粪混合均匀，模拟鸡舍内垫料。
3.2.3 制备增菌液及平板 按照说明分别配制缓冲蛋白胨水（BPW）、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、氯化镁孔雀绿增菌液（MM）、液体连四硫酸盐（USP）（FTM），灭菌分装备用，以下以BPW、SC、MM、FTM代替增菌液名称;将普通营养琼脂、麦康凯琼脂、SS琼脂、XLT4琼脂制备成琼脂平板备用。
3.2.4 实验分组 A组选用BPW为前增菌液，SC、MM、FTM增菌液，分别标记为A-SC、A-MM、A-FTM;B组SC为前增菌液，SC为增菌液;C组MM为前增菌液，MM为增菌液;D组FTM为前增菌液，FTM为增菌液，A～D组分别再做添加不同量沙门氏菌菌液的三组对比，即不添加沙门氏菌菌液、添加100μL 102CFU/mL沙门氏菌菌液、添加100μL 103CFU/mL沙门氏菌菌液。
3.2.5 实验方法、步骤（无菌操作）
3.2.5.1 准确称量25gⅠ组垫料加到225ml的BPW、SC、MM、FTM前增菌液中混匀，A组前增菌液做六个重复，即A1-SC、A1-MM、A1-FTM、A2-SC、A2-MM、A2-FTM、A3-SC、A3-MM、A3-FTM;B、C、D组前增菌液做三个重复，即B1、B2、B3，C1、C2、C3，D1、D2、D3;准确称量25gⅡ组垫料加到225ml的BPW、SC、MM、FTM前增菌液中混匀，A组前增菌液做六个重复，即A1'-SC、A1'-MM、A1'-FTM、A2'-SC、A2'-MM、A2'-FTM、A3'-SC、A3'-MM、A3'-FTM;B、C、D组前增菌液做三个重复，即B1'、B2'、B3'，C1'、C2'、C3'，D1'、D2'、D3'。 3.2.5.2 A1-SC、A1-MM、A1-FTM、B1、C1、D1、A1'-SC、A1'-MM、A1'-FTM、B1'C1'D1'前增菌培养中不添加沙门氏菌菌液;吸取100μL 102CFU/mL沙门氏菌菌液添加到A2-SC、A2-MM、A2-FTM、B2、C2、D2、A2'-SC、A2'-MM、A2'-FTM、B2'、C2'、D2'的前增菌液中摇匀;吸取100μL 103CFU/mL沙门氏菌菌液添加到A3-SC、A3-MM、A3-FTM、B3、C3、D3、A3'-SC、A3'-MM、A3'-FTM、B3'、C3'、D3'的前增菌液中摇匀，37℃温箱培养24h。
3.2.5.3 培养后产物增菌：取前增菌培养物1mL加入9ml相对应的增菌液中37℃温箱培养24h。
3.2.5.4 培养基平板传代：用接种针取增菌培养物一环划线于培养基平板，分别为普通营养琼脂、SS琼脂、麦康凯琼脂、XLT4琼脂平板，37℃温箱培养24h。
3.2.6 培养结果 见表1。
3.2.7 结果判定 将分离到的可疑沙门氏菌纯化传代，进行单因子诊断血清凝集实验，凝集A-F多价血清，凝集O9、O12、Hg、Hm，诊断为肠炎型沙门氏菌。
由以上实验可以看出BPW前增菌液对沙门氏菌的选择性不高，当样品被大量其他细菌污染、沙门氏菌含量较少不是优势菌群时，沙门氏菌不宜分离到，FTM对沙门氏菌的增菌效果要好于SC，MM增菌效果比SC差，所以对污染物进行沙门氏菌分离时用FTM两次增菌效果较好，能快速有效的分离沙门氏菌。
4 结论
对鸡群环境进行沙门氏菌检测是对鸡群健康监控的有效手段，选用合适的培养基可确保我们的实验结果准确。由以上实验可以看出，样品较为干净、杂菌较少时，可用BPW进行前增菌，SC或MM或FTM增菌，再结合普通营养琼脂、SS瓊脂、麦康凯、XLT4的有效组合可以有效分离沙门氏菌，当样品较脏、杂菌较多而沙门氏菌含量较少不是优势菌群时，用FTM两次增菌，再结合普通营养琼脂、SS琼脂、麦康凯、XLT4组合效果较好，能快速有效的分离沙门氏菌。□
收稿日期：2020-03-20
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