实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的 临床意义分析

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　　【摘要】 目的 分析实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测在人巨细胞病毒（HCMV）感染中的应用价值。方法 选取363例疑似HCMV感染患儿及50例健康儿童， 均采集血样进行实时荧光定量PCR检测。分析荧光定量PCR检测结果， 并比较不同性别、不同年龄HCMV感染的阳性检出情况。结果 实时荧光定量PCR检测显示， HCMV感染患儿中32例为阳性， 阳性率为8.82%;健康儿童中1例为阳性， 阳性率为2%。阳性患儿的HCMV载量在5.0×102～1.0×104 copies/ml。HCMV感染患儿阳性率高于健康兒童， 差异具有统计学意义（P<0.05）。188例男性CMV感染患儿的阳性率为9.04%（17/188）， 175例女性CMV感染患儿的阳性率为8.57%（15/175）， 不同性别HCMV感染患儿阳性率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。152例年龄<1岁CMV感染患儿的阳性率最高， 为14.5%;其次为1～3岁患儿， 阳性率为6.9%;109例>3岁患儿的阳性率最低， 为2.8%;不同年龄段CMV感染患儿的阳性率比较差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 <1岁儿童由于机体的免疫力和抵抗力较弱， 容易出现HCMV感染的情况， 因此需要借助实时荧光定量PCR技术进行筛查， 从而尽早诊断和治疗， 能够避免严重并发症的出现。
　　【关键词】 实时荧光定量聚合酶链反应;人巨细胞病毒感染;临床诊断
　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.07.013
　　Analysis of clinical significance of real-time fluorescence quantitative PCR in detection of human cytomegalovirus infection   TAN Tian-zhao， LI Xue-fang， HUANG Guang-rong. Yangchun People’s Hospital， Yangchun 529600， China
　　【Abstract】 Objective   To analyze the value of real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （PCR） in detection of human cytomegalovirus （HCMV） infection. Methods   A total of 363 suspected HCMV infection children and 50 healthy children， and their blood samples were collected for real-time fluorescent quantitative PCR detection. The results of fluorescent quantitative PCR detection were analyzed， and the positive rates of different genders and different ages were compared. Results   According to real-time fluorescent quantitative PCR， there were 32 positive cases， with a positive rate of 8.82%; 1 case of healthy children was positive， with a positive rate of 2%. The HCMV load of positive children was 5.0 ×102-1.0×104 copies/ml.
　　The positive rate of HCMV children was higher than that of healthy children， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive rate of 188 male children with CMV infection was 9.04% （17/188）， and the positive rate of 175 female children with CMV infection was 8.57%. There was no significant difference in the positive rate of HCMV infection between male and female （P>0.05）. The highest positive rate was 14.5% in
　　152 children with CMV infection< 1 year of age， followed by 6.9% in children 1-3 years of age， and the lowest was 2.8% in 109 children > 3 years of age， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion   <1 year old children are vulnerable to HCMV infection due to weak body immunity and resistance， so they need to be screened with the help of real-time quantitative PCR technology. Thus avoid serious complications by early diagnosis and treatment. 　　【Key words】 Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction; Human cytomegalovirus infection; Clinical diagnosis
　　HCMV是一种常见的致病因， 人是该病毒的唯一宿主。孕期出现的HCMV感染可由胎盘传染给胎儿， 引起死胎、早产等问题， 对母婴健康造成较大的威胁。同时哺乳期也可通过乳汁造成新生儿感染， 引起新生儿发育障碍[1]。婴幼儿在感染HCMV之后， 由于免疫系统发育不成熟， 可引起严重的病变， 同时该病的临床症状多样化且无特异性， 存在一定的诊断困难。病毒培养是病毒感染诊断的金标准， 但是由于培育时间较长， 很难在临床普及， 而病毒抗体检测在婴幼儿中的敏感度与特异性不够理想[2]。实时荧光定量PCR是近些年来临床医学推广的新技术， 在病毒检测中具有快速、高效的特点。为了进一步分析该技术的应用价值， 文章选取2018年2月～2019年5月363例本院收治疑为HCMV感染患儿进行观察， 研究如下。
　　1 资料与方法
　　1. 1 一般资料 选取2018年2月～2019年5月本院收治的363例疑似HCMV感染患儿， 其中男188例， 女175例;年龄3 d～12岁， 平均年龄（2.1±3.3）岁。另选取同期50例健康儿童作对比分析。
　　1. 2 方法 所有研究对象均采集血样， 并行实时荧光定量PCR检测， 本次研究采用進口实时荧光定量PCR仪以及HCMV DNA测试盒。具体操作方法：采集所有研究对象的外周静脉血2 ml， 2500 r/min离心
　　5 min， 之后取100 μl血清加入100 μl DNA浓缩液混匀之后以12000 r/min离心10 min， 弃上清液并加入20 μl DNA提取液， 并在100℃恒温箱中放置10 min， 再以
　　12000 r/min离心5 min， 然后提取3 μl使用实时荧光定量PCR仪进行检测， 严格按照仪器以及实际说明书进行操作。
　　1. 3 观察指标 分析荧光定量PCR检测结果， 并比较不同性别、不同年龄HCMV感染的阳性检出情况。
　　1. 4 统计学方法 采用SPSS16.0统计学软件处理数据。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验以及秩和检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2. 1 实时荧光定量PCR检测结果分析 实时荧光定量PCR检测显示， HCMV感染患儿中32例为阳性， 阳性率为8.82%;健康儿童中1例为阳性， 阳性率为2%。阳性患儿的HCMV载量在5.0×102～1.0×104 copies/ml。HCMV感染患儿阳性率高于健康儿童， 差异具有统计学意义（P<0.05）。
　　2. 2 不同性别HCMV感染患儿阳性率比较 188例男性CMV感染患儿的阳性率为9.04%（17/188）， 175例女性CMV感染患儿的阳性率为8.57%（15/175）， 不同性别HCMV感染患儿阳性率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。
　　2. 3 不同年龄CMV感染患儿阳性率比较 152例年龄<1岁CMV感染患儿的阳性率最高， 为14.5%;其次为1～3岁患儿， 阳性率为6.9%;109例>3岁患儿的阳性率最低， 为2.8%;不同年龄段CMV感染患儿的阳性率比较差异具有统计学意义（P<0.05）。见表2。
　　3 讨论
　　HCMV感染是一种常见的疾病， 尤其是儿童， 感染率>80%。HCMV在感染之后经过系统治疗虽然临床症状完全消失， 但是病毒并不会完全被清除， 而是潜伏在人体形成终生感染。该病属于条件致病菌， 当宿主由于各种因素造成的免疫力下降时， 潜伏在人体中的病毒可能增殖明显而引起感染症状[3]。孕妇在感染HCMV之后， 能够通过多种途径引起胎儿HCMV感染， 如胎盘垂直传染、产道感染以及乳汁传播等， 可引起多种不良预后， 对母婴健康安全造成了较大的影响。因此需要尽早发现和治疗， 避免影响胎儿的正常发育。而HCMV感染可引起多组织器官受累， 包括肝脏、肺脏、肾脏、心脏以及淋巴系统等， 约有90%的HCMV感染婴幼儿虽然为无症状感染， 但是仍有一部分患儿存在语言障碍、听力障碍以及学习困难等后遗症， 有一部分宫内HCMV感染的患儿在出生后发现存在黄疸、肝脾肿大以及发育畸形等问题， 由于患儿的临床症状存在多样化的特点， 无法通过观察患儿的临床症状来早期诊断， 因此需要利用先进的检测技术进行筛查， 从而降低这些问题的出现， 能够确保婴幼儿的健康成长。
　　ELISA法检测HCMV免疫球蛋白M（IgM）抗体一直被认为是HCMV感染临床诊断的重要方法， 这主要是由于HCMV感染后3～5 d人体即可产生相应的IgM抗体， 且抗体的持续时间>3个月[4]。但是临床研究指出， 部分IgM阴性的患儿可能由于免疫机制发育不完善， 因此在HCMV感染之后未出现IgM抗体或是抗体消失， 同时IgM阳性并不能作为HCMV感染的唯一指标， 这主要是由于风湿因子以及过往疱疹病毒感染残留的病毒交叉反应也可造成假阳性现象， 从而影响了该检查技术在HCMV感染临床筛查中的应用[5]。此外， 该方法无法评价药物治疗效果以及患儿的预后情况。
　　实时荧光定量PCR技术是近些年来临床医学新推出的一种检测技术， 其主要是将基因扩增、分子杂交以及荧光化学等技术相结合， 利用PCR扩增产物进行分析， 且该过程是在封闭环境中实现的， 因此能够避免污染和无法定量的问题。该技术能够快速检测HCMV的DNA水平， 从而反映患儿病毒感染的严重程度与HCMV DNA复制水平， 从而指导临床诊断、用药和疗效评价。因此， 实时荧光定量PCR技术在HCMV感染的临床诊断中具有较好的应用效果。 　　本次研究结果显示， 实时荧光定量PCR检测显示， HCMV感染患儿中32例为阳性， 阳性率为8.82%;健康儿童中1例为阳性， 阳性率为2%。阳性患儿的HCMV载量在5.0×102～1.0×104 copies/ml。HCMV感染患儿阳性率高于健康儿童， 差异具有统计学意义（P<0.05）。188例男性CMV感染患儿的阳性率为9.04%（17/188）， 175例女性CMV感染患儿的阳性率为8.57%（15/175）， 不同性别HCMV感染患儿阳性率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。152例年龄<1岁CMV感染患儿的阳性率最高， 为14.5%;其次为1～3岁患儿， 阳性率为6.9%;109例>3岁患儿的阳性率最低， 为2.8%;不同年龄段CMV感染患儿的阳性率比较差异具有统计学意义（P<0.05）。这可能是由于婴幼儿免疫系统发育不成熟， 容易受到病毒的感染， 而随着年龄的增长， 身体的免疫力和抵抗力增强， 因此HCMV感染与儿童的年龄密切相关。对于出现黄疸、肝损伤以及肺炎等症状的患儿， 若未发现明显诱因， 需要尽早进行实时荧光定量PCR测定， 筛查有无HCMV感染， 同时对于肝功能损伤的患儿需要积极进行保肝治疗， 避免肝损伤的进一步加重[6-8]。
　　综上所述， <1岁儿童由于机体的免疫力和抵抗力较弱， 容易出现HCMV感染的情况， 因此需要借助实时荧光定量PCR技术进行筛查， 从而尽早诊断和治疗， 能够避免严重并发症的出现。
　　参考文献
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　　[收稿日期：2019-12-05]
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